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楼主: lmahappy
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[请教] 养细胞养得郁闷   [复制链接]

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发表于 2011-5-5 12:31 |只看该作者
对呀 你养的是什么细胞 会不会细胞密度太大了
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发表于 2011-5-5 15:19 |只看该作者
细菌污染的话培养基很容易变黄啊,这个可以用平板来检测。
6 }  f- a; A9 _# M& _+ j! [: u而且培养基容易变黄,不一定是污染啊,我们这边肺癌A549,也是培养基一天就变黄(两天就可以长满),但是细胞形态正常,培养基中很干净,,而且检菌也是没有菌的。
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发表于 2011-5-5 23:47 |只看该作者
支原体染色 支原体不是培基变黄的唯一原因,图里是HOECHEST33258染色,C是有感染支原体的,E是没有感染的。
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发表于 2011-5-6 08:15 |只看该作者
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检测支原体感染(mycoplasma),可用DAPI染色法,也可用PCR的方法。DAPI染色后如果细胞有一个清晰轮廓的细胞核,细胞膜周围没有着色的雾状染色物质,就是没有感染,相反如果有就是感染了。PCR法有卖成品试剂盒的,有引物和阳性对照,将长满细胞后的培养基上清做个PCR即可。
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发表于 2011-5-6 09:38 |只看该作者
上图,另外附上你的培养液方案,另外测一下你的培养液的PH值,看看是不是你的培养液本身的酸度就处在临界的位置,污染,没那么容易吧。个人意见
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发表于 2011-5-6 09:42 |只看该作者
培养液变黄也不一定也污染,看要是怎么样的黄,如果是单纯的透亮的黄色那应该是细胞生长较快,这个一般是在培养原代细胞时多见,特别是有组织块在的时候,培养液会很快变黄,但是应该是透亮的黄色。如果培养液变黄,同时变得浑浊那应该是污染了,建议扔掉,找到污染源重新开始。
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发表于 2011-5-6 09:57 |只看该作者
要么就是传的太浓,要么就真是污染了!
- _- x+ C# P3 X5 D+ z但是污染的话一般可以看出来,支原体污染你可以做一个支原体污染检测,很快的!- A- q  L8 ~, F4 G$ |; d7 c5 s
阁下的培养液加了多少碳酸氢钠啊?
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发表于 2011-5-6 15:26 |只看该作者
支原体不会搞的培养基很快黄掉的,考虑细菌污染吧,如果你培养基里有抗生素,在培养初期是看不出细菌生长的。
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发表于 2011-5-6 15:31 |只看该作者
回复 lmahappy 的帖子( a4 [" x" k" o/ M* Z2 e& x

; Q/ V" D5 o/ r- N培养液酸度过大,很快就变黄了,不过对细胞没什么影响;染支原体的话得检测了才知道
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发表于 2011-5-6 19:20 |只看该作者
细胞若是支原体污染 ,通过细胞核染料染色后,背景中亮点特多,一看就知道的,向夜空中的星星
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