原代脐带MSCs培养，胶原酶消化20cm能获得多少细胞？

1301918986

我想问问你们的消化液胶原酶是几型的，是和胰酶联合使用吗，比例是多少？

death0270

如果是单纯的去血管后切小块消化，那么消化时间要延长才行，一般是消化过夜吧。

yanmin

回复 aibi1983 的帖子! I( Q% f  k" ~" x% q- C* D/ z
( k2 A8 N# ?, }9 p
请问你们做组织块贴壁，我有几个问题想请教一下1 P' I  E' P- ^* e
1、贴壁的组织是剪得很碎吗？大概有多大？: T8 M* s4 b  H- D
2、你们组织块贴壁的时候组织块一直贴在瓶底，不会飘起来吗？
! w6 m( O4 I1 z8 N5 E3、组织剪碎后是不是先贴于瓶底，于37度放置一下，然后再加培养液？
1 R$ e1 ~9 Q; ^4、初次加培养基大概加多少，是将组织刚刚没过就好吗？以T-25的瓶子为例~  Y9 r) E+ e" P# o0 a; W
5、一般你们做组织块贴壁都是用多大的瓶子？
3 A/ s( [) E% S麻烦您帮我解决一下这些困惑，谢谢~~

金戈

ljj0558 发表于 2011-5-20 10:56 7 x/ d% Y$ T; N8 H; T) Q
计数啊 ，就是5x106/ml 接种的

- l3 ?9 y7 X/ E1 }9 d& s! L
这个密度？？？太高了吧？？？？

ljj0558

回复 金戈 的帖子
  \( x) W5 P. e! x, d# a0 P
8 p9 {. q+ ]; Q* y; E# ^4 i4 f大部分都不是的  一点都不高

lyj-0017

回复 lyrsea 的帖子
" R& z: x) Y3 f! V+ N4 {' |, Y3 v$ @' y: [  S- u
能否分享学习一下你们的酶消化方法和离心清洗过程？谢谢

lyj-0017

回复 lyrsea 的帖子
% y9 l7 l7 Z5 I  _/ n" W( ~: ?5 \, ]( {0 }$ P. o; {& |
能否分享学习一下你们的酶消化方案和离心清洗过程？谢谢

yanxm920

酶消化法对细胞损伤大，影响细胞的活力，建议用组织块法，有效提高细胞的活力！

漾轩

回复 lyj-0017 的帖子4 C& k. ~- z7 E" o5 s( }8 U) R
  Q; ]  x' d: G& D- H0 ~
0.125%浓度T75 3ml,室温消化3分钟，然后培养瓶清洗两遍，收集细胞悬液，离心去上清即可

yangyaping

原代培养细胞长到30%-40%就可以传代了，所以本来就不是很多，如果要多的话，建议传代培养