神干分化后的β-Tublin和GFAP双染90%重叠是怎么回事？

2008xiao

      是抗体的原因吗？之前用的国产GFAP感觉不够清晰，几乎不和β-Tublin重叠。后来买了Sigma的就出现了这种情况（β-Tublin没换，二抗也没换，排除抗体的宿主选择等理论性错误）。有类似经验的麻烦给点建议，多谢了！

2008xiao

补充：很多明显的很长的神经丝也被染上两种颜色，总的来说感觉GFAP把所有的细胞都染上了。是神干分化的某个过程会同时表达这两种蛋白吗？可是之前做了很多次也没出现这种情况。

dxldeyou_2006

同样的问题，请问有知道怎么回事的吗？

zb_ming

新现象，新问题，关注ing。关键是要弄清楚到底是试剂的问题还是操作的问题，或者是细胞的问题，比如固定、洗脱、孵育抗体浓度时间等，还要考虑分化时间问题，是否在同一个时间段，细胞密度、细胞状态等等，要考虑的因素很多。核心问题是：如果能够排除客观原因造成这种现象的出现，比如试剂、操作等等，那这个问题或现象就有意义了。可以深入追踪研究，说不定能追赶小保方晴呢，哈哈，加油！

axh

我们之前也买过sigma的GFAP抗体，确实存在与Tuj1共染的问题，建议GFAP抗体使用DAKO的，不会与Tuj1发生共染。

limeiying

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( @) ]( z% F8 R: N9 h% @  c' B  W
我之前做大鼠脊髓神经干细胞的诱导分化，DMEM/F-12+5%FBS, 诱导了7d, 用Sigma的GFAP和CST的MAP2或Abcam的β3-Tubulin做免疫荧光双重染色，也出现了共表达的情况，同样很困惑。

招财鼠

同样很困惑ing...............