PCR亚克隆

nekdgf4

我做的
4 h- q3 a: `  T+ w3 t$ R基因:2ul
2 i! T2 S. d; g, c上下游引物:0.5 ul
9 ?+ N% i: Z, @: `3 @8 Cqd plous :10ul ; S6 h" n4 w6 C( b$ P# [/ G7 ~
h2o 阳性：7ul  阴性:9ul
9 |' [: T: o- N0 E0 z0 x分别做了5支，加一支阴性管8 W- H! ~0 ^& J( o$ t' |( Q; U
电泳结果是阴性和阳性条带长短，亮度都差不多，是什么原因啊  H4 t6 ]2 m: E8 G% O
引物和水应该不会污染，还有加样很小心, k0 }5 s4 _0 ?# |3 _: m# a+ }
怎么阴性还是出了
, g5 M( u% r- ^  l还要继续胶回收吗？

jun8013

引物污染，概率很大，也可能空气污染，你所操纵的环境污染，做的次数多了？但一般是引物污染概率大，不行就去无菌室做一次。

hndxws

条带大小是否是你想要的大小？该现象是否有重复性？这两个问题比较关键

张也行

如果你的基因在实验室做的很多，那么很可能酶，水，引物都已经污染了。正如楼上所说的，如果你的结果能重复的话，那最好所有都换新的，连地方都换个新的。呵呵 去其他实验室做做看

chliu

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  W0 E7 p5 x4 u5 W6 V& c* J* o3 s
% ]. H% Z% [, o7 @) e! g  X扩出来的条带大小和预期的相同么？如果相同的话，很有可能阴性管里污染进去了模板。如果片段大小与预期的不同，那各个成分都有可能被污染了其他的东西。

chliu

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1 _& z9 g4 C6 \% O! i9 A- M8 }4 P% h7 i7 L' o2 D) \3 P, s
建议就不要胶回收了，重新做PCR