我的鼠骨髓间充质干细胞用5mlHyclone的0.25%胰蛋白酶

cheese

可能是你的胰酶4℃存放时间过长失效了，也可能是你的细胞不是MSCs，MSCs很好消化的。

骨道边

昨天刚消化了两瓶软骨细胞，弃掉培养液后加入胰酶，刚好盖过瓶底就差不多了，然后拧紧瓶盖放在37度摇床里消化5分钟后加入新鲜培养液停止消。冲洗下来就可以了

大少爷

消化之前用大约10ml生理盐水洗一遍，然后可以加入5ml左右0.25胰酶消化（胰酶必须是正常的，不必加EDTA），可以稍微晃动一下培养瓶，让酶液与细胞充分接触，37度3-5min。倒置显微镜下观察细胞変圆，收缩即可。迅速加培养基终止消化。