我的鼠骨髓间充质干细胞用5mlHyclone的0.25%胰蛋白酶

taxuewuge

7 F0 u% O, M! Q; r. e
* S* C3 x* w+ N4 ]7 c3 P我的鼠骨髓间充质干细胞用5mlHyclone的0.25%胰蛋白酶（含EDTA）消化，12分钟后在100倍光镜下观察只有20%的细胞变圆，请教各位出现这种情况的原因是什么。谢谢

sfk06

消化好不好，不能只看细胞圆不圆，最终要看分散成单细胞的情况，另外，不能的细胞消化的条件会有所差别的，具体需要自己慢慢摸索下

taxuewuge

请问，我应该根据什么现象来终止消化呢？谢谢

皮搋子

1. 首先在弃去培养液后要用PBS清洗2次，去除细胞上剩余的血清，如果清洗不干净的话，血清会中止胰酶的消化作用。. |# ^8 `; i1 o5 m4 b: E$ J
2. 对于比较难消化的细胞，在消化前，用的PBS、胰酶都要温浴到37度，或者是直接放到培养箱中，同时加入胰酶后将培养瓶盖上盖子也放到培养箱中，因为酶的作用效果因温度变化影响很大。
! @7 V, g5 a$ o9 \. W, r' ~$ ]0 l3. 细胞不要等到长的非常满的时候再传代，细胞密度越大，消化越吃力。; X9 E' E0 \; g- q, N
4. 终止消化要看大部分都已经圆缩，小部分轻轻摇晃培养瓶的时候已经开始漂浮时迅速中止。
1 F: }4 S  t) Q6 W5. 估计楼主是忘记PBS清洗了。

taxuewuge

我用D-Hank's洗了3遍才加胰酶的

金戈

1. 是洗涤去除血清
! t0 {2 L1 S, r/ C2.消化时的温度37度
7 f6 Z$ x+ F/ o3.杂细胞

ljj0558

我认为你需要换一批胰酶试试，
# {. p* A# C3 s( d& v; M- R  N或者你用你的胰酶消化一下其他的细胞 看看效价怎么样。  t% I' O' ?) v% b5 F" M$ u6 J
再或者你的MSC有问题，

yinjiqingqq

间充质细胞挺容易消化的，首先要确定胰酶是否有效，再有你的细胞状态怎么样，建议上个图看看

taxuewuge

谢谢各位

beginner

我的MSC只需要0.25%胰酶消化一分钟就好了。你的消化时间太长了吧。胰酶存放时间太长了，或者培养基没有清洗干净，还有就是37摄氏度。