肿瘤干细胞球传代后死亡问题！

WAX

      将肿瘤细胞消化计数，调整细胞浓度为1个/μl ，在含有B27，EGF,FGF的DMEM/F-12中进行培养，每隔3-4天进行半量换液。约10天以后长出一些约100μm克隆球，机械吹打使克隆球分散并重新接种，6天以后长出的克隆球按相同的方法再次传代，两天后发现好多细胞已经死了，至今天已有5天，仍没见有细胞分裂，绝大多数细胞已死亡，怎么解决呢？相当着急，请大家不吝赐教，谢谢！

amosummer

回复 WAX 的帖子6 t  D* a! o, l0 O- ?. u4 ?% S

) s) ]( e3 H" p- a你做的是细胞系还是原代的啊！

WAX

回复 amosummer 的帖子! o/ Z8 U) Z/ x% E- ~
. d6 O! [& D' r2 R3 z
细胞系。

shen_coco

你的是什么细胞系啊，半量换液是怎么换的？会不会你机械吹打太过了，把细胞弄死了

WAX

回复 shen_coco 的帖子
- x! d: ^( c' u  T, x4 b8 ^& P( Y, A: Q" ], R7 O
是A549，存在机械吹打损伤细胞的可能，但不至于基本上都死了啊，况且第一次传代挺好的。至于半量换液，静置一会，把上层培养基轻轻吸掉再加新鲜培养基就好了啊！

shen_coco

回复 WAX 的帖子% R' t+ f+ x8 V! J

9 ]; Q. M  P9 a9 a3 @& h细胞系我不清楚，原代肿瘤干细胞有可能传到四、五代的时候就会发生分化或者死亡，不能继续往下传代了，不知道细胞系有没有这种可能。

WAX

回复 shen_coco 的帖子
$ F6 K# A5 @) d8 l5 U+ Q
( |3 q6 O$ ]/ `$ }3 _; [& T. E5 }是的，也有可能吧！