求牛或猪耳组织块酶消化法分离细胞方法

SCNT

大家好：求牛或猪耳组织块酶消化法分离细胞方法，最好有详细步骤以及酶的浓度，处理时间等，谢谢！

牙牙丫丫123

首先将组织块洗净 ，然后剪成碎块，越小越好，用0.25%的胰酶消化10分钟，在镜下观察单个细胞数量，若是不多或者组织块较大的话可以试着在消化5——10分钟，然后终止离心后接种

SCNT

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( d5 {( I9 X3 z2 v( L& u0 B不需要使用胶原酶吗？

牙牙丫丫123

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$ z) b8 Z+ l. D# n" y也可以使用胶原酶，不过就是胶原酶的作用效果比较慢，需要几个小时或者过夜消化，一般胰蛋白酶就可以了
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SCNT

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7 Q9 v4 J% x; X' z0 h0 T
好的，谢谢，不过我想知道如果用胶原酶的情况下，其具体浓度和时间是多少，谢谢

牙牙丫丫123

你可以试一试一型胶原酶和二型胶原酶，浓度是1mg/ml或者5mg/ml，浓度的差别最终决定你消化时间的长短，你可以试一试，应为配置的每一批酶的具体酶活性也不样，所以这要你具体摸一摸条件。

牙牙丫丫123

你可以试一试一型胶原酶和二型胶原酶，浓度是1mg/ml或者5mg/ml，浓度的差别最终决定你消化时间的长短，你可以试一试，应为配置的每一批酶的具体酶活性也不样，所以这要你具体摸一摸条件。

bllx58

胰酶消化15min后，1mg/ml胶原酶消化3h，效果不错，分离的猪的Fibroblast

ambassador

牙牙丫丫123 发表于 2011-6-11 20:16 ! v7 w  e, q- {. v
首先将组织块洗净 ，然后剪成碎块，越小越好，用0.25%的胰酶消化10分钟，在镜下观察单个细胞数量，若是不多 ...

9 ], G& ]1 E8 ]' A/ Q" P; Z  e你离心后不是组织块都到下面去了，怎么和细胞分开来呢？？不是过滤了直接取液体吗？

redcam

我有一篇不错的文章，你可以参考一下' @4 ~2 A3 h, X9 f