求牛或猪耳组织块酶消化法分离细胞方法

SCNT

大家好：求牛或猪耳组织块酶消化法分离细胞方法，最好有详细步骤以及酶的浓度，处理时间等，谢谢！

牙牙丫丫123

首先将组织块洗净 ，然后剪成碎块，越小越好，用0.25%的胰酶消化10分钟，在镜下观察单个细胞数量，若是不多或者组织块较大的话可以试着在消化5——10分钟，然后终止离心后接种

SCNT

回复 牙牙丫丫123 的帖子
' m, s6 r5 ]9 j1 c8 ^
5 f6 m& H6 U- @0 {. W0 {不需要使用胶原酶吗？

牙牙丫丫123

回复 SCNT 的帖子
. C+ }( j' w6 \8 k- L+ A( w. m% p3 o8 F% I. J
也可以使用胶原酶，不过就是胶原酶的作用效果比较慢，需要几个小时或者过夜消化，一般胰蛋白酶就可以了+ r& x2 D+ B* D2 e( I" [

SCNT

回复 牙牙丫丫123 的帖子
% ?5 W2 P% U& s( d- j5 O5 r
4 p% q3 p: L" S3 Z6 b. e( ?- q好的，谢谢，不过我想知道如果用胶原酶的情况下，其具体浓度和时间是多少，谢谢

牙牙丫丫123

你可以试一试一型胶原酶和二型胶原酶，浓度是1mg/ml或者5mg/ml，浓度的差别最终决定你消化时间的长短，你可以试一试，应为配置的每一批酶的具体酶活性也不样，所以这要你具体摸一摸条件。

牙牙丫丫123

你可以试一试一型胶原酶和二型胶原酶，浓度是1mg/ml或者5mg/ml，浓度的差别最终决定你消化时间的长短，你可以试一试，应为配置的每一批酶的具体酶活性也不样，所以这要你具体摸一摸条件。

bllx58

胰酶消化15min后，1mg/ml胶原酶消化3h，效果不错，分离的猪的Fibroblast

ambassador

牙牙丫丫123 发表于 2011-6-11 20:16
% w# r) W3 v! n/ j首先将组织块洗净 ，然后剪成碎块，越小越好，用0.25%的胰酶消化10分钟，在镜下观察单个细胞数量，若是不多 ...

' L  I( r# Y- [0 F" r你离心后不是组织块都到下面去了，怎么和细胞分开来呢？？不是过滤了直接取液体吗？

redcam

我有一篇不错的文章，你可以参考一下
/ g8 g2 Z" a7 L8 D