如何浓缩慢病毒？

sizhengliu

我要做慢病毒转染，现在想自己来浓缩慢病毒，看了一些资料，发现病毒浓度不高，浓缩是一个关键问题。我在的实验室有4度离心机，目前我还没有买任何试剂。请有经验的朋友路过指教，我怎样比较有效率的浓缩慢病毒？还需要什么东西呢？不胜感激！！

daviddow

超速离心，大约32000rpm，3个小时

sizhengliu

回复 daviddow 的帖子" B: f8 o+ ^5 x4 B1 ~

: M6 o, C" w( \/ [* b$ M谢谢！用你的方法，你能得到的滴度一般是多少呢？

huangcong1988

  病毒的收获及浓缩, d9 G$ P% m+ o( g0 Y: d3 {
（1)收集转染后48h（转染即可为0h计起）的293T细胞上清液。% a$ h2 K& j& r% p: i
（2)于4℃，4000g离心10 min，除去细胞碎片。! b5 I6 n& k  L
（3)以0.45μm滤器过滤上清液于40ml超速离心管中。: V4 Q, L+ ]/ f& i; l2 b# M; t
（4)把病毒粗提液样品加入到过滤杯中（最多19 ml），盖上盖子。将过滤杯插* `8 K/ \; F2 Y3 d! K( U/ l
到滤过液收集管中。- X  S. g. G5 y4 ~# [* Q5 F
（5)组合好后，做好平衡，放在转头上。' Q0 \$ r+ u: h( P  ]( d
（6)在4000g离心，至需要的病毒浓缩体积。通常需要的时间为10-15min。
) Y6 H5 L5 J4 I/ y7 ^, m8 u8 H" M4 z（7)离心结束后，取出离心装置，将过滤杯和下面的滤过液收集杯分开。& T9 \2 e! c9 j3 e
（8)将过滤杯倒扣在样品收集杯上。2 q5 S/ j& |* y5 V( v" G9 |
（9)离心力不超过1000g,时间为2min。过高转速会导致样品损失。把离心杯从
. h) v0 f6 z% {7 K( g! k: u8 f样品收集杯上移开。样品收集杯中的即为病毒浓缩液。" z/ N- U6 E/ x* y) o; w2 E
（10)将病毒浓缩液移出，分装后保存在病毒管中，-70℃长期保存。取其中一支2 H; P: l* K% ~. `4 b6 {1 ~
进行病毒生物学滴度测定。
, B" I  [* s6 Y

shihuijunm

超滤管就可以，但滤膜是100k的，Millipore的有卖

daviddow

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% p7 M% i  O, ?* k. }/ a1 R过滤杯是在哪里买的？还有收集管？谢谢

huangcong1988

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- B% j8 R( w8 p2 O; _
5 ~% [  w) H; s3 c9 g在一般的试剂耗材公司应该都能买到

daviddow

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+ i3 [& J) u) R; \7 b3 b  q' m- z
国内的公司有吗？价格

huangcong1988

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2 l/ P5 E( e9 G* f& N/ f3 T( `. U- `9 m( f6 e4 b
这个不提清楚，呵呵，应该是不贵，耗材

wangyimei

如果有条件可以用BECMAN低温超高度离心机，26000rpm 2hours ,然后倒掉离心上清，可看到白色的病毒沉淀，再用PBS重悬