如何浓缩慢病毒？

sizhengliu

我要做慢病毒转染，现在想自己来浓缩慢病毒，看了一些资料，发现病毒浓度不高，浓缩是一个关键问题。我在的实验室有4度离心机，目前我还没有买任何试剂。请有经验的朋友路过指教，我怎样比较有效率的浓缩慢病毒？还需要什么东西呢？不胜感激！！

daviddow

超速离心，大约32000rpm，3个小时

sizhengliu

回复 daviddow 的帖子$ a+ f* o( |4 u6 v9 Q

& {) }5 O: H% T8 `- P+ {- w4 X谢谢！用你的方法，你能得到的滴度一般是多少呢？

huangcong1988

  病毒的收获及浓缩
; o6 V* c1 T; {4 C6 ]: [# W8 F$ ]（1)收集转染后48h（转染即可为0h计起）的293T细胞上清液。7 J4 Y) J/ p2 B: A# H  P* A6 M
（2)于4℃，4000g离心10 min，除去细胞碎片。
$ u7 F5 i5 O& }2 f& i8 O* H（3)以0.45μm滤器过滤上清液于40ml超速离心管中。; N: v9 N! m& R
（4)把病毒粗提液样品加入到过滤杯中（最多19 ml），盖上盖子。将过滤杯插
) S; N, @* p, u, E- n* y2 Y到滤过液收集管中。, N1 F/ R8 N# w: P4 G- L
（5)组合好后，做好平衡，放在转头上。, j, Q1 E( ]1 H# [5 f" s
（6)在4000g离心，至需要的病毒浓缩体积。通常需要的时间为10-15min。
# e, {" H3 [: ^（7)离心结束后，取出离心装置，将过滤杯和下面的滤过液收集杯分开。& Q4 k; v! D1 [4 v, e6 X; C
（8)将过滤杯倒扣在样品收集杯上。. }( |$ q$ C' f6 P. ]# g
（9)离心力不超过1000g,时间为2min。过高转速会导致样品损失。把离心杯从: n, A8 l5 K4 Y5 v% y( o
样品收集杯上移开。样品收集杯中的即为病毒浓缩液。
+ F: I6 L8 x; h/ Y6 o! o（10)将病毒浓缩液移出，分装后保存在病毒管中，-70℃长期保存。取其中一支
+ t0 @4 K! L2 h8 h) i进行病毒生物学滴度测定。8 d: h, Q5 [2 E% h6 x

shihuijunm

超滤管就可以，但滤膜是100k的，Millipore的有卖

daviddow

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* U9 W7 o6 m3 D. G过滤杯是在哪里买的？还有收集管？谢谢

huangcong1988

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+ i  t1 |5 J& i+ j3 }+ E在一般的试剂耗材公司应该都能买到

daviddow

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! v2 x; \/ J9 _$ w
国内的公司有吗？价格

huangcong1988

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3 I( w, i- `) e$ m
% ]" y' {% D/ ]' c- G这个不提清楚，呵呵，应该是不贵，耗材

wangyimei

如果有条件可以用BECMAN低温超高度离心机，26000rpm 2hours ,然后倒掉离心上清，可看到白色的病毒沉淀，再用PBS重悬