求救，转染的问题

always_wp

回复 wwy551 的帖子4 I  E  _: g" |
! j% d4 _/ e) k# `4 {) M# p6 |0 r
好的，谢谢！如果再遇到问题再向你请教了~

pla269

你是想稳转还是瞬转？我现在做慢病毒，转染方式不同方法和效率都不同啊

always_wp

回复 pla269 的帖子- r3 N$ c# }( x* M

7 K3 p2 C2 T* T5 O5 i7 T4 ^你好 ，我是想做稳定转染的，转进去目的基因后想进行移植。能不能说说你的方法呢，谢谢啦

always_wp

回复 sdjjfangfang 的帖子
1 e4 X& ?5 i& E0 n4 e, N* I+ C5 b- A  p; e
哦，那我的ES是在MEF上养的，我看到有说用时间差贴壁法去除，请问一下 你们的feeder在转染前是怎么去除的

always_wp

回复 wwy551 的帖子
) f' x  ~" H: x  P) K
2 B- A/ W0 ?) t7 w6 i6 Z* @" c9 r- M你好，我再想麻烦问一下，就是转的时候用病毒孵育，90min，这里面的ES 还带着消化下来的feeder么，还用不用现将feeder去除呢？谢谢啦

pla269

稳转，一般都用病毒，我做的是慢病毒，感染效率高，免疫原性低，做好包装质粒mdlg、rsv/rev、vsvg，再加上你的目的基因，参照invitrogen公司的方案用lip2000和opti-mem感染293细胞，收3次48小时以内的病毒，然后就可以用病毒上清感染你的目的细胞了，感染效果不好的话，就把病毒浓缩一下

wwy551

回复 always_wp 的帖子
- b9 }/ O: S7 W
; n9 l1 h* S1 n0 G' d这个影响不大，因为之前悬浮转染，完了还要在把ES转到FEEDER上去过夜感染。传代的时候ES本来就是连着FEEDER一起传代，传几代估计就更没什么影响了。

always_wp

回复 wwy551 的帖子, @$ {3 W( c! P

: t# \( f+ c5 D- z  q5 E+ S  U7 L恩，明白啦 3Q

sdjjfangfang

回复 always_wp 的帖子+ Y% D5 g( y/ y/ H, q6 ^

( |( k9 `8 [- Q' k1 j2 X把ESZ转到在Matrigle 上培养呀，之前可以考虑用沉降或者是低速离心的方法去除MEF

always_wp

回复 pla269 的帖子  l& T; [$ I, n' B5 G

1 U% A5 q* d3 u" m2 J$ e你好，我还想问一下，如果要是用G418筛选，那筛选的浓度范围是在多大的浓度范围内进行筛选的呢，必须要从100-1000ug/ml之内，每间隔100来筛选么。; E/ H. x! ~  Z* A, {. y/ S- P
谢谢啊. k0 i* e! I( ~