求救，转染的问题

always_wp

回复 wwy551 的帖子; ?; M$ q! I6 a. C9 s  U( I7 @; N
, T+ `& x1 U: Y
好的，谢谢！如果再遇到问题再向你请教了~

pla269

你是想稳转还是瞬转？我现在做慢病毒，转染方式不同方法和效率都不同啊

always_wp

回复 pla269 的帖子. M3 u; ?) h' B( ]! o

4 D2 e! |+ y2 g% c( y9 g2 X你好 ，我是想做稳定转染的，转进去目的基因后想进行移植。能不能说说你的方法呢，谢谢啦

always_wp

回复 sdjjfangfang 的帖子. ]- I/ ]% I3 [4 I; f  S1 z
  r" ]& h$ D& f$ r/ p7 T" r
哦，那我的ES是在MEF上养的，我看到有说用时间差贴壁法去除，请问一下 你们的feeder在转染前是怎么去除的

always_wp

回复 wwy551 的帖子
8 [+ r- N  |! c8 C0 z/ i1 q) e: [9 K: ?
你好，我再想麻烦问一下，就是转的时候用病毒孵育，90min，这里面的ES 还带着消化下来的feeder么，还用不用现将feeder去除呢？谢谢啦

pla269

稳转，一般都用病毒，我做的是慢病毒，感染效率高，免疫原性低，做好包装质粒mdlg、rsv/rev、vsvg，再加上你的目的基因，参照invitrogen公司的方案用lip2000和opti-mem感染293细胞，收3次48小时以内的病毒，然后就可以用病毒上清感染你的目的细胞了，感染效果不好的话，就把病毒浓缩一下

wwy551

回复 always_wp 的帖子' t2 V( @; P' e# R# h/ r4 l4 _
, [$ B7 Y& }6 `
这个影响不大，因为之前悬浮转染，完了还要在把ES转到FEEDER上去过夜感染。传代的时候ES本来就是连着FEEDER一起传代，传几代估计就更没什么影响了。

always_wp

回复 wwy551 的帖子4 R3 p7 l6 T  a6 S3 o" o7 i  |
  k. T0 t% \6 v4 e
恩，明白啦 3Q

sdjjfangfang

回复 always_wp 的帖子1 i1 l! J5 R% b3 F
3 X- M6 j# ~8 O
把ESZ转到在Matrigle 上培养呀，之前可以考虑用沉降或者是低速离心的方法去除MEF

always_wp

回复 pla269 的帖子9 v5 n: H* J' X; {0 l, p

3 G3 [( T) s. N你好，我还想问一下，如果要是用G418筛选，那筛选的浓度范围是在多大的浓度范围内进行筛选的呢，必须要从100-1000ug/ml之内，每间隔100来筛选么。  A" F8 S3 R0 D& f) ~' Q
谢谢啊
( C$ a3 Y4 c& |; `