试着提了两次大鼠原代BMSC，均以失败告终，前辈们给些建议吧，万分感谢

taoli10000

回复 taxuewuge 的帖子
/ V  I% J- X& {5 z' c6 Z* N! W: u/ Y+ [% ]) G9 }. Z; Y
嗯，谢谢，学习了哦！呵呵% L8 `$ A5 t: Y$ z7 B

taoli10000

回复 luoziwei 的帖子
' K4 X9 R, J* U. H; p8 c0 D* d1 L; U) U
嗯，打算下次提取的时候两根骨头提一瓶T25 的试试
) u( F6 H5 S1 H* R# ~3 q* t

taoli10000

回复 飞翔的十字架 的帖子, S! ^5 X* ^5 C: v# V- Q
* z2 F1 r$ L# X1 Q; J! ^
呵呵呵，没有图啊。。。。打算增加细胞密度看看怎么样。。。

细胞海洋

回复 jiojoo 的帖子
* u& g: V2 x! K( @- R& j! P0 ]% T( [& K' o9 I
建议你发个新帖

lizhiyong

回复 taoli10000 的帖子
* Q6 V- i. i9 [7 q: }6 z, S; |) j' k" A* u, ~; @/ Y6 r+ P
你是等于全骨髓培养的；为什么不尝试冲出骨髓液之后，过大鼠淋巴细胞分离液，取单个核细胞，用DMEM+10%血清（我用的是Hyclone公司），大约原代需要8天左右可传代，中途可以半量换液，尽量不要天天关注细胞（因晃动，影响贴壁），双抗加的浓度太高，千分之一至千分之三，足矣；多了不宜。传代消化时间不宜过长，0.5%的胰酶+EDTA，约需3-5分钟，镜下有松动，吹打几下，就会掉下来。圆的细胞可能是巨噬细胞等淋巴细胞，3次传代几乎可以排除（其贴壁较牢固）。希望对你有用。。。

cheese

回复 taoli10000 的帖子+ O$ b& P6 X/ ^1 y) Y8 I+ C3 o/ ~

$ b, h6 e" F% I% T' R1 Y+ n可以试一下4-6周的，可能会好一些

taoli10000

回复 lizhiyong 的帖子  m" P9 C# o. C
- \6 I- r; _2 k0 w+ @7 ~
好的，谢谢，尝试一下吧

如冰

你好，我培养的是WISTAR大鼠的BMSC，觉得还是比较好养的。想和你分享一点体会：我取的是下肢共四块骨头，每块一瓶，在注意无菌的前提下一定要加快取骨的速度，时间长了细胞的活性会降低。也不知道你用的大鼠是几周的？一般5周左右的各个方面都是比较好的。三天换液的时候细胞量不是很大，但是1周左右可观察到较多的细胞巢，如果细胞局部很密集，可先行原瓶打散，不要急于传代，因为细胞量少的话会影响细胞的生长。您消化的时间可能有点长，消化时要在显微镜下观察，不是一定要消化多少时间，当观察到细胞皱缩快要脱落的时侯就停止就好了，消化时间过长对细胞影响会比较大，甚至会过度消化致死。希望这些体会会对你有所帮助，祝你早日成功！

qiqishichaoren

很奇怪的，我们的是GIBICO  的，上面写着保存在4℃

taoli10000

回复 qiqishichaoren 的帖子8 U. L( ~. ]% v# w
9 B8 u/ O3 [' H# b  y; R' w5 E
培养基一般都是4度保存的，只有里面要加的谷胺酰胺之类的是-20度保存