关于传代

taxuewuge

我养的是SD-大鼠骨髓间充质干细胞，每次传代后细胞都长得很慢，而且死的细胞特别多。每次消化时间不超过2分钟。请教各位大虾是什么原因造成这样的结果。胰酶是0.25%加3ml，终止的培养基加4ml.谢谢给位。

yxc

    应该说，骨髓间充质干细胞的实验方法本身并不难，但是这种细胞数量不算多，要成功培养取决于取材、培养的许多环节。比如，大鼠的周龄不宜过大，我们一般取4周以内的大鼠，否则数量少、活性差、传代难。又如，培养基中各成分的浓度，各成分的品质，pH值，传代后种植细胞的密度，都会影响到细胞的生长。

mason658616

我养人的，应该差不太多。感觉你消化的时间太长了，我一般T25的瓶加1ml 0.25%胰酶，在显微镜下观察最多有30秒钟就差不多了，确实也会有半天消化不下来的，但那些细胞基本是状态不好的，下不来就算了，消化过久对细胞有损伤。而且胰酶一定要倒掉，留在培养基里也会影响生长。另外，看你P0的时候是不是接种密度太低了，传代是不是过晚有些细胞状态不佳了。

taxuewuge

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我原来也是采用倒掉胰酶的方法，但是在倒掉胰酶的同时也会倒掉消化下来的细胞，这样留在瓶里的细胞就更少了。我一般P0都在贴满瓶90%后才传代的。如果我只消化1分钟的话就会有70%的细胞消化不下来，那应该怎么办呢？谢谢指教