请教大家用于细胞转染的质粒如何灭菌

wqcyqy0811

请教大家一个问题，我最近用小提质粒试剂盒提取质粒，用于细胞转染，但每次转染后就会出现污染的现象，请问大家是如何对提取后的质粒灭菌的？

jhu132llh

没遇到过这种情况
5 N4 m  e# o8 P# o& R8 K2 i2 Q" }我们的质粒也是正常提取的
2 q9 D+ _: }6 e7 u2 Z' L1 X不用做什么灭菌直接转没问题的3 X* b- c0 u9 T
要不试试转染后培养液中加点抗生素试试$ f; x4 a& y4 D4 z

scottist

有一种专门过滤质粒的小滤器，估计一般公司都有卖的，滤过之后就无菌了，不过或多或少会有点损失。

langziforever

提取质粒怎么可能灭菌呢！那样的话质粒不是全部都变性了成单链了！所以，如果需要除菌只能过滤，但是一般来讲，你只要提质粒最后一步溶解的水是严格无菌的，应该就问题不大，建议还是考虑下你转染过程的操作！

igdb

在酒精洗二遍的时候拿到超净台里去做。最后用无菌水溶质粒。  我们实验室都是这么做的，从来没有出现过污染的情况。

亮亮燕燕

我们实验室质粒转染不灭菌，第一次见到还要灭菌啊！学习了！

xiangchou812

很简单的，做个乙醇沉淀就可以了。先加入1/10体积预冷的醋酸钠（3M）和2.5倍体积的无水乙醇，-20度放30min，12000rpm离心10min。弃上清，加入1mL70%无水乙醇，重悬，12000rpm离心5min。然后于超净台等无菌地方弃上清，挥发乙醇。加入适量无菌水或TE溶解即可。

huangcong1988

用去内毒素的试剂盒提，在超净台上操作，不用过滤的，直接转细胞就行

keliny

我们用的也是无内毒素的质粒小提试剂盒，但加入95%乙醇是在超净台外，并且已经在超净台外抽提了一次质粒，那么，今后用同一个试剂盒怎么处理才能提出无需过滤的质粒呢？请战友帮忙了

b6122

提取质粒这么苛刻的条件都还能长菌？多半是最后一步的水没有灭菌吧？
/ T* e- T. y* G! {5 e  L# |我们提取质粒甚至连超净台都没有用，kit法和直接大规模提取都做过，都没有长过菌