关于无血清培养污染

丁子

最近的无血清培养肿瘤干细胞 发现不管是用培养板还是用培养瓶，无血清培养都要比有血清的容易污染，不知大家遇到有没有同样的问题？我想通过在培养基中加入抗生素来解决这个问题，但是又担心影响成球，不知道有没有谁有过这样的做法，想听取大家的经验或者建议，谢谢。

jhu132llh

正常条件下是不存在无血清培养都要比有血清的容易污染的问题的0 g( b& T- H6 r% W& f8 I5 M) n
要是发生污染，不管你有无血清，都会发生污染；; A+ C* o2 G+ U2 L
其实有血清的培养液中营养组分更复杂，更全面，应该更利于细菌和真菌生长，应该是更容易发生污染的；而无血清培养体系中成分简单多了，应该是不容易发生污染的。0 g' c  Z! B9 X8 ?
1.把所有东西能灭的都灭一下菌吧；
) o3 |! |5 Q* m6 O2.仔细查查各个可能引起污染的因素，包括培养液。

yylhxylong

个人认为血清中还有一部分成分现在并没有明确，很有可能是一些防止异源物质的生长，在不加血清之后，首先供给细胞的营养物质不再像以前那样充分，即使添加效果也不会比原来的好，东西毕竟原装的比较好。
" U3 \9 i5 [( u. K& T- a8 b. X不加血清，部分抗异源物质的因子不存在，再加上细胞的生长状态不佳，所以对污染的抵抗能力有一定程度的下降。个人没有做过加入一些抗生素来进行培养细胞，不过应该有对细胞生长没有影响的抗生素，觉得楼主可以一试，很有意义的。

丁子

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+ n" F/ \0 {* K# g, ]8 @2 M' Q+ Y! b4 W" L! m0 u
对于抗生素是否有影响 也只有自己试试看了  

丁子

回复 jhu132llh 的帖子9 P  t  D7 p9 j6 c- Y- y+ M

0 r& G( p7 I, [# i4 W% C3 I之所以认为无血清的容易污染 是因为我在实验中发现，将有血清培养的细胞转接到无血清培养后，一般2天左右 培养基就变浑了，而同样细胞来源的细胞在有血清培养的条件下培养则没有问题。今天再次仔细观察了一下有血清培养的细胞，培养瓶里确实存在一些小黑点（估计是黑胶虫），但是量不多，我在想，是不是这些虫子到了无血清的环境下生长快一些。当然，也不排除无血清培养基本身存在污染的可能，下次抽过在用，其他的用具也重新消毒一次，再培养看看。谢谢，欢迎讨论。

amosummer

好像加双抗不会影响成球吧。我的培养基里面是加过双抗，成球还算正常。所以可以试试加点双抗，也可以避免污染啊！

丁子

回复 amosummer 的帖子: s8 ~* q) p" E: j' z% Y2 e/ e4 d8 Q

. ], _8 y% @& P! B) c/ Z( U+ P5 {4 S+ m+ A双抗是直接加在无血清培养基里面的吗？添加的比例和有血清的是一样吗？谢谢

bin

我觉得原代培养污染的话，加血清可能更容易发现，因为加血清后，培养基营养很全面，细菌可以在很短的时间内增殖而使培养液发黄和浑浊，在不加血清的培养液中，由于刚开始细菌量不多，可能要经过几天的潜伏期才能使培养液变黄。我的原代取材细胞，刚开始培养3天内一点也看不出污染的迹象，在第三天后，培养液一晚上就变黄了。很多细胞球培养中也加低浓度的抗生素，但是我觉得还是在取材时注意才好。