骨髓间充质干细胞培养经验交流

zarecol

抛砖引玉，我先说我的，我是从骨髓血中提取间充质干细胞，血刚来的时候感觉很粘稠，而且血液中脂肪含量也多，需先用PBS清洗2次后去掉上清，洗去脂肪。培养的时候密度梯度离心法提取的细胞专一行大于全骨髓培养，我想请教大家的是：培养的时候需不需要在培养液中加入抗凝血剂。

lizhiyong

你的骨髓液来自哪里？若是献髓者，你得到的骨髓液是已经肝素化的骨髓液。你自己不需要再加用什么抗凝剂了。

lizhiyong

加入2倍骨髓液体积的PBS稀释过滤，之后过人淋巴细胞分离液，会处理的很好的；如果用PBS洗两遍，势必丢失部分MSC

zarecol

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8 V! B3 C* l2 q8 v- O过滤的话用100微米的效果好不好？如果骨髓粘稠的话会不会影响分离效果？

zarecol

回复 lizhiyong 的帖子" }4 ?' a% u) d6 K* v
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肝素的用量是每毫升多少单位？

viv2005

我想知道的是为什么那种黏黏糊糊的东西会变多呢，我是从大鼠里提取，整个骨髓离心的时候觉得红色沉淀没多少，吹散后接着培养，然后第二天觉得整个盘子都被覆盖了，取上清离心，离下来的红色沉淀至少是头一天的2倍以上，我以后红色是红细胞，可红细胞不会增值啊，lz能解释下，这个是为什么么

zarecol

这个我想是这样的，你第一天铺瓶的时候红细胞有悬浮于培养液中的，等你第二天看的时候，都沉降到了瓶底，所以就形成了你说的那种情况了

lizhiyong

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* U: [' O( O( a2 [0 w- `  e过滤的目的，是过滤大的血块，组织块等很大的杂物，会影响Ficoll分离，影响贴壁，100um过滤很可能会丢失细胞。因为骨髓液一般相对粘稠。你再试试看吧。实验没有死套路的。。。

lizhiyong

回复 zarecol 的帖子, _9 `8 B6 H8 Z" ~0 _1 {5 r# x+ g

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