u6启动子与miRNA超表达 - 实验室综合讨论区干细胞之家



免疫细胞治疗专区	欢迎关注干细胞微信公众号

返回列表

查看: 64591\|回复: 7	go [请教] u6启动子与miRNA超表达 [复制链接]

runsong

中级会员

Rank: 3 Rank: 3

积分: 955
威望: 955
包包: 755

热心会员优秀会员小小研究员积极份子帅哥研究员美女研究员金话筒精华勋章

楼主

发表于 2011-7-10 22:05 |只看该作者 |倒序浏览 |打印

36包包

在用含有u6启动子的载体进行miRNA超表达时，应该克隆pre-miRNA序列还是应该克隆将pre-miRNA前后各延伸几十bp的pri-miRNA序列呢？
u6启动子可以驱动转录多大的片段？

最佳答案

苏眉1989 查看完整内容

一般用miRNA前体，加上其两旁的侧翼序列，然后再加上你所需要的酶切位点，让他走miRNA的自然加工途径就好！只克隆成熟序列，最后出来的不知道会是什么，也许产生的东西根本与miRNA无关。

已有 1 人评分	威望	包包	收起理由
细胞海洋	+ 2	+ 10	欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 2 包包 + 10 查看全部评分

回复引用

Rank: 2

积分: 52
威望: 52
包包: 146

沙发

发表于 2011-7-10 22:05 |只看该作者

一般用miRNA前体，加上其两旁的侧翼序列，然后再加上你所需要的酶切位点，让他走miRNA的自然加工途径就好！只克隆成熟序列，最后出来的不知道会是什么，也许产生的东西根本与miRNA无关。

已有 1 人评分	威望	包包	收起理由
细胞海洋	+ 5	+ 10	欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 5 包包 + 10 查看全部评分

回复引用

举报返回顶部

icefoxx

新手上路

Rank: 1

积分: 1
威望: 1
包包: 39

藤椅

发表于 2011-7-11 09:45 |只看该作者

你转入的受体是什么细胞?

已有 1 人评分	威望	包包	收起理由
细胞海洋	+ 1	+ 5	欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 1 包包 + 5 查看全部评分

回复引用

举报返回顶部

runsong

中级会员

Rank: 3 Rank: 3

积分: 955
威望: 955
包包: 755

热心会员优秀会员小小研究员积极份子帅哥研究员美女研究员金话筒精华勋章

板凳

发表于 2011-7-11 22:56 |只看该作者

包装细胞是293t6 `' V, A6 h2 _. }( i' ~: `

已有 1 人评分	威望	包包	收起理由
细胞海洋	+ 1	+ 5	欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 1 包包 + 5 查看全部评分

回复引用

举报返回顶部

苏眉1989

注册会员

Rank: 2

积分: 52
威望: 52
包包: 146

报纸

发表于 2011-7-14 21:43 |只看该作者

一般用miRNA前体，加上其两旁的侧翼序列，然后再加上你所需要的酶切位点，让他走miRNA的自然加工途径就好！只克隆成熟序列，最后出来的不知道会是什么，也许产生的东西根本与miRNA无关。

已有 1 人评分	威望	包包	收起理由
runsong	+ 1	+ 2	谢谢提供信息

总评分: 威望 + 1 包包 + 2 查看全部评分

回复引用

举报返回顶部

runsong

中级会员

Rank: 3 Rank: 3

积分: 955
威望: 955
包包: 755

热心会员优秀会员小小研究员积极份子帅哥研究员美女研究员金话筒精华勋章

地板

发表于 2011-7-14 23:42 |只看该作者

回复苏眉1989 的帖子
6 |7 W) {5 a$ c5 j, T
你们一般用于超表达miRNA的载体是哪个？' y2 A! ^' Z& |3 U5 ~- l
我用过pEGFP-CI和DsRed-C1载体超表达miRNA,效果还成。' \& Z3 |) w/ n; X' j. {
现在想上慢病毒载体，一时间没了主意，不知道选哪个载体好。6 |" e5 n% E& u" {+ }, l7 s4 h
我们这里有pll3.7、pLOX-iresTK系列等载体。