经历两次BMSC提取失败后终于看到曙光，在此感谢大家的帮忙！分享一下实验改进

jss667795

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' O- g- j6 [/ z" Y0 mLZ,血清密度提高后细胞长的如何呢？我也养大鼠的，WISTAR。但是一直养的不太好，怀疑是密度太低。细胞很容易老化。 到现在也没养出来，同是新手还希望多多交流哈`！

yishengyouwoly

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' K( z- \7 R0 S% tp4的时候做流式能达到，90%很难相信呢，之前听同学说，自己养得细胞，分选的时候只有百分之几，我就是自己养得，很受打击。

james_0619

我做的是SD大鼠，取的是股骨，原代还好，长得还行，一传代就不行了，细胞稀稀拉拉的不知道问题出在哪里！我还加了双抗啊
3 F( _0 l6 U2 s7 x$ S4 a/ Q难道是没加1%的谷氨酰胺？？很希望得到楼主的真传啊
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nightvsday

一般我提MSC不需要加双抗的

taxuewuge

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: f. c. h+ n5 L( y6 A
2 j5 g% z( X0 W7 Z请教你用的老鼠是多重的，年龄是多大的。我养的原代都要长11天才能铺满瓶，而且传到二代细胞就很少了，能分享一下你传代的经验吗？谢谢
6 c8 ~% H" p6 M  i+ e: ~

taoli10000

回复 james_0619 的帖子& l6 {$ ~4 Y. e% [% v

- `2 Y' U: Q& l2 b, G5 I. \  }$ K2 T首先培养基很关键的是血清要好，国产的太难用，然后培养基要尽量新鲜。如果确定用的试剂没有问题了，就考虑一下消化操作，这个很有影响，消化时间，传代时候的密度等等，慢慢摸索一下，很快就好的。。。自我感觉这个细胞提取还是有点拼几率的。。。

taoli10000

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" m+ o% |7 E2 c6 c0 P; p9 l我用的是6周大地老鼠，你可以尝试一下提高原代提细胞的密度。传代的话和普通细胞的操作差不多，只是时间上要控制好，我一般是加入胰酶之后，轻轻荡一下，差不多10秒之内会看到胰酶的颜色稍微变黄，然后，吸出胰酶，只留下一点点，培养箱中放一分钟，马上拿出在显微镜下观察，此时会有少量细胞漂浮，基本上细胞都变园，然后轻巧培养瓶底部，会看到许多细胞漂浮起来，接着便立即中止消化。这样算下来，整个消化时间大概在两分钟左右，自我感觉每次传代还可以。希望对你有帮助吧

水兰色

楼主胰酶消化是加EDTA的还是不加的呢？

taoli10000

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加了的

chenyuemily

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# X6 I2 I$ k$ a* R那消化停止后，还吹打吗？会不会把非MSC一起消化下来啊？