经历两次BMSC提取失败后终于看到曙光，在此感谢大家的帮忙！分享一下实验改进

jss667795

回复 taoli10000 的帖子
+ l5 O- i7 F- z6 X* y1 V
* V3 u' J3 n9 n. j$ I0 TLZ,血清密度提高后细胞长的如何呢？我也养大鼠的，WISTAR。但是一直养的不太好，怀疑是密度太低。细胞很容易老化。 到现在也没养出来，同是新手还希望多多交流哈`！

yishengyouwoly

回复 taoli10000 的帖子! h7 Y9 Y/ Y: C  w
( S! G' Y# o' z5 @& K- m4 z9 w2 h) F  P
p4的时候做流式能达到，90%很难相信呢，之前听同学说，自己养得细胞，分选的时候只有百分之几，我就是自己养得，很受打击。

james_0619

我做的是SD大鼠，取的是股骨，原代还好，长得还行，一传代就不行了，细胞稀稀拉拉的不知道问题出在哪里！我还加了双抗啊* W9 T3 y$ u. w- M, G
难道是没加1%的谷氨酰胺？？很希望得到楼主的真传啊& E6 m  s8 {3 a: M; a" n. V* @

nightvsday

一般我提MSC不需要加双抗的

taxuewuge

回复 taoli10000 的帖子" m* F( O7 K  j% `/ s
$ z+ Z: A8 z3 [4 l6 M6 a
请教你用的老鼠是多重的，年龄是多大的。我养的原代都要长11天才能铺满瓶，而且传到二代细胞就很少了，能分享一下你传代的经验吗？谢谢
/ D; Z, E# @- J. [

taoli10000

回复 james_0619 的帖子* c8 U4 v- f& _) a' U" s

" w# Z! j" [" G$ W3 t' g首先培养基很关键的是血清要好，国产的太难用，然后培养基要尽量新鲜。如果确定用的试剂没有问题了，就考虑一下消化操作，这个很有影响，消化时间，传代时候的密度等等，慢慢摸索一下，很快就好的。。。自我感觉这个细胞提取还是有点拼几率的。。。

taoli10000

回复 taxuewuge 的帖子
- M& M# E2 |  H! O2 U% `: J: n; L+ s6 C' x; x- S$ A  {
我用的是6周大地老鼠，你可以尝试一下提高原代提细胞的密度。传代的话和普通细胞的操作差不多，只是时间上要控制好，我一般是加入胰酶之后，轻轻荡一下，差不多10秒之内会看到胰酶的颜色稍微变黄，然后，吸出胰酶，只留下一点点，培养箱中放一分钟，马上拿出在显微镜下观察，此时会有少量细胞漂浮，基本上细胞都变园，然后轻巧培养瓶底部，会看到许多细胞漂浮起来，接着便立即中止消化。这样算下来，整个消化时间大概在两分钟左右，自我感觉每次传代还可以。希望对你有帮助吧

水兰色

楼主胰酶消化是加EDTA的还是不加的呢？

taoli10000

回复 水兰色 的帖子' A9 U  K" F$ w' L9 A; |" s' j$ Y

% {9 G7 U9 c' v9 [1 v加了的

chenyuemily

回复 taoli10000 的帖子
0 W$ b' N4 ]9 k) U, c
- p: S9 }0 w, q& l那消化停止后，还吹打吗？会不会把非MSC一起消化下来啊？