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[请教] WESTERN检测乙酰化的抗体 [复制链接]

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金话筒 优秀会员

楼主
发表于 2011-7-19 09:14 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
大家好,我昨天发了一个帖子是个有关磷酸化的,今天我想再请教一下乙酰化抗体检测的时候是不是也有一些注意事项呢?我接下来可能要做乙酰化的WB检测
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优秀会员 金话筒

沙发
发表于 2011-7-19 10:04 |只看该作者
本帖最后由 grape 于 2011-7-19 10:12 编辑 5 _  r2 Q2 ~. ]
  H$ X0 e: Q* ]
回复 mayansen1314 的帖子
- x  D% T3 d/ ~9 `
4 j/ ^+ }5 I8 j/ G关于乙酰化抗体的选择  h( D7 W" N4 m# B% a" m

  c5 u) v' ]+ g3 }# Shttp://www.immunechem.com/所提供的乙酰化抗体在世界的知名度很高,其抗乙酰化抗体发表的文章有近20多篇,大部份发表在Cell, Science, Nature, Molecular Cell等一流杂志,主要条带集中在组蛋白、p53和能量代谢的线粒体蛋白;Dr. chunaram choudhary采用他们的抗体,分别在2009, 2010发表在Science两篇高引用率的文献;Haigis, Leonard采用他们的抗体,在2009发表在Cell.$ v( k3 W& S! L# H; G( `/ c9 [

+ H( j: E4 g4 g. ~1 Y7 K0 S Acetyl Lysine antibody.jpg
% _  U9 v4 z, v4 b/ ^# a% ]( L  l5 W% H7 j7 ]
Acetyl Lysine Antibody" o5 c$ ]$ o- |! b* Z6 m
      & B- Q: K  {  e- `# _# K
CatalogNumber     Pack Size               Price(CNY)
- c# U4 s) o  L9 O4 d2 l+ QICP0380               100 µg        ¥2,000.00
; }* [' w8 ^" {  A/ ~  ~6 _  W
; n. }4 ]$ z) DProduct Description: This pan-specific antibody is affinity purified using acetyllysine affinity chromatography.  It recognizes proteins with acetyllysine residues.  The product has been utilized for proteomic studies of the protein acetylation, immunoaffinity charomatography separation and isolation of the acetylated protein and peptides from protease-digesting proteins of the whole cells.  
" m- h7 w& p1 q8 z' @
% I+ @8 C9 {6 s2 Z) D. b) PSpecies: Rabbit
; Y: H$ ~# B* l2 E# E' @! ^# `3 t  i- A2 R' Z8 z4 r
Formulation: 250 µg/mL antibody stored in PBS, 50% glycerol
/ q" V4 T& T; `; l% D8 Q8 w- i( X( G- v
Storage & Stability: Store product at -20 ℃. Three years
' p3 d( o. i* m1 ?% h- P( H0 |4 i& E, `1 ^- o% ~2 ]
from date of shipping.  
, U) M" p6 d3 Z- W( C! y0 d7 c& K. ^& H5 {4 }
Immunogen: Acetylated KLH conjugates
1 u- G# ^" Y, ~0 A7 Y* }( Z7 f! `" a1 C5 t$ V
Purification: The antibody was purified on acetyl-lysine agarose
$ {& S% \% X% K4 a( Z: @0 Q; N( M) m, Y
Specificity: The antibody recognizes proteins acetylated on lysine residues. * @' t( B, A% p! m  [$ B
" q" O+ O( ^5 c
Application: ELISA,WB,IP,IHC,IF. % q5 F- J# o7 Z$ G1 |. U

. K+ X# [/ v. L# O* W( }Tested: Acetylated histone, acetylated BSA, and acetylated MBP, no reaction to the non-acetylated proteins
8 I% s( ]9 G5 j! O# S' F8 `8 k6 p) R. s2 e5 Y) B4 `0 D) _6 N
Scientific Description: DNA transcription can not take place unless DNA is unwound from the nucleosomes.  The cell unwinds the DNA by acetylation of lysine residues within the proteins.  It has been suggested that acetylation of non-histones proteins (e.g., transcription factors) and histones may be involved.  Acetylation of the proteins may result in signal transduction within the chromatic domains.7 _' p, p$ r3 R& }8 \
5 q2 h/ \/ N# n+ x, r
References: & l2 U0 I5 g" E$ M8 c
1. Zeng, L. et al FEBS Lett. 2002, 513, 124-128 (2002) . O* z6 Q$ B& n
2. Kim. S. et al Molecular Cell, Volume 23, Issue 4, Pages 607-618 9 }# F1 s  K9 Q6 m7 `% R6 E6 M

8 Z4 w8 h) k; X. p1 \" @
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藤椅
发表于 2011-7-19 11:18 |只看该作者
其实也和其它的WB一样
3 v6 c( u5 n& G# E做实验都一样,再怎么小心也不为过+ |9 f: \9 e+ x
就是操作注意点就可以了/ C! G7 x. X. P: |8 Q* R
抗体的话,只要能染出来的抗体就是好抗体, o6 J7 ]/ x- U5 N
选个牌子货就可以的了,不一定非得挑就得是哪一个牌子的; ~3 O0 F/ ]+ T% ?3 H
有时候那个牌子还真不一定好买
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板凳
发表于 2011-7-19 12:24 |只看该作者
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做多抗乙酰化WB确实挺难的,一定要按照抗体说明书要求地去做。实验的波动性还是比较大的。
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报纸
发表于 2011-7-20 08:16 |只看该作者
回复 grape 的帖子- r  U7 w6 }3 V' E: U! b1 s1 d

. h; F5 L) Y, u% N8 L十分感谢,我还真是要做组蛋白的乙酰化

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地板
发表于 2011-7-21 16:50 |只看该作者
以细胞为原材料提蛋白做WB有个优势,简单易行,不像组织、器官提出的蛋白经历的时间那么长,相对来说不易降解,我也觉得不论是磷酸化还是乙酰化的抗体,做的时候严格按基本步骤进行就可以了,WB不像IHC,不经过固定的步骤,注意事项没那么多
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发表于 2012-6-30 21:04 |只看该作者
想问一下组蛋白乙酰化WB是用总蛋白来跑还是用核蛋白跑好一些?
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发表于 2012-6-30 21:07 |只看该作者
回复 mayansen1314 的帖子0 c* a; ~  d* g) T2 v& l: g" `

( M/ k+ ^" s' O7 C你好,请问你现在还做组蛋白乙酰化的检测吗?我有些问题想要请教你下

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小小研究员

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发表于 2012-7-1 15:19 |只看该作者
回复 puddingwawa 的帖子4 `$ T. y3 i& \" a

7 H0 H) q8 U/ _  e/ d建议你发新帖提问,论坛很多高手的。

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发表于 2012-7-1 15:28 |只看该作者
回复 细胞海洋 的帖子
( Z, k7 `# Y, i8 t7 I  _+ l6 y
% h& ^7 p- e0 K4 o好的,谢谢~
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