MEF是先铺后灭活好还是先灭活后铺好？

dongxin

我们采用后者，效果还是很不错的！

liuyunhui2004

回复 christophe 的帖子
0 C4 O8 ^$ t3 V3 C3 F0 U7 @, K2 r# M* |/ J* r
和我们用的方法一样

ldy689689

我用的是后者，但是有一次我没有处理冷冻过的了，就现用现处理了几板，结果与冷冻的效果一样。

tigerfish

常用的程序是灭活后冻存，使用的时候再解冻铺出来

majing217

先处理，然后冻存，用时在复苏。

varing

两种都有优缺点：
. }$ R2 s8 s, e: S& f+ \丝裂霉素处理后冻存，复苏后细胞一般会死很多，没有不处理直接冻存的复苏效率高，优点是取出后复苏好就可以铺板用；
7 D2 F/ X- w7 V先冻存再处理的话，复苏效率高，但每次都要用撕裂霉素处理一次，而且复苏后一般会有一代左右的传代操作，等于细胞传代数又多了。
2 P0 E$ M; r" F; Z# J+ a* H本人倾向于第二种方法。虽然传代数多点但细胞数目密度能保证。

dilal

回复 varing 的帖子
3 U* g" S* y1 p
. z. {+ U$ s8 ]分析很到位，的确是

bobo198666

一般是P2代处理，长到80%左右用10ug/ml丝裂霉素处理3个小时，冻之前一定要用PBS洗干净，4遍，否则残余的丝裂霉素对之后实验影响很大

准姿梅影

我一般用P5的MEF，现处理，工作量是比较大，但是可以通过解冻细胞的状态判断饲养层的好坏。大批量处理再冻的方法也可以，不过要考虑处理后细胞在解冻后是不是利于ES细胞的生长，各有利弊吧

houbara

either way, it depends on your experince. If your feeder cells is established cell line, such as STO, frozen mitomycin C inactivated cells is more convinient. and assure the repeatbility of your result.
1 b0 ^. s" L* \But it always better to do a couple  of times trials, and work out your working protocols.