MEF是先铺后灭活好还是先灭活后铺好？

dongxin

我们采用后者，效果还是很不错的！

liuyunhui2004

回复 christophe 的帖子! p3 U! W5 t) w. z6 x. F+ ?

% @5 u3 v- F3 c  I( }和我们用的方法一样

ldy689689

我用的是后者，但是有一次我没有处理冷冻过的了，就现用现处理了几板，结果与冷冻的效果一样。

tigerfish

常用的程序是灭活后冻存，使用的时候再解冻铺出来

majing217

先处理，然后冻存，用时在复苏。

varing

两种都有优缺点：! f0 L- s6 a8 b! J; w& L) ^) E
丝裂霉素处理后冻存，复苏后细胞一般会死很多，没有不处理直接冻存的复苏效率高，优点是取出后复苏好就可以铺板用；' N3 u. i( q, \, F( O( K3 p5 f
先冻存再处理的话，复苏效率高，但每次都要用撕裂霉素处理一次，而且复苏后一般会有一代左右的传代操作，等于细胞传代数又多了。5 H' O. p. M( z. _
本人倾向于第二种方法。虽然传代数多点但细胞数目密度能保证。

dilal

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! w* M# U. O3 A  Q- q. c6 L
! f9 U% `2 ^! G" o  f& p分析很到位，的确是

bobo198666

一般是P2代处理，长到80%左右用10ug/ml丝裂霉素处理3个小时，冻之前一定要用PBS洗干净，4遍，否则残余的丝裂霉素对之后实验影响很大

准姿梅影

我一般用P5的MEF，现处理，工作量是比较大，但是可以通过解冻细胞的状态判断饲养层的好坏。大批量处理再冻的方法也可以，不过要考虑处理后细胞在解冻后是不是利于ES细胞的生长，各有利弊吧

houbara

either way, it depends on your experince. If your feeder cells is established cell line, such as STO, frozen mitomycin C inactivated cells is more convinient. and assure the repeatbility of your result.5 Z$ c9 o) z3 @) L
But it always better to do a couple  of times trials, and work out your working protocols.