角膜缘细胞

chenjiahuan

角膜缘细胞在传代过程中，总是有大量细胞死亡，该怎么办？向各位大侠请教！

oucflora

这要看你的细胞是多少代的细胞，采用的什么传代的方法哦。$ L' I0 E( n) ]9 Q9 |7 W
如果细胞是连续性细胞系的话，你的传代方法很有问题。原因可能是胰酶处理时间过长，细胞损伤比较严重，可能是你的培养条件不合适，还有可能就是你每次传代前细胞状态不好。/ S" d) |* G- q# G. n/ `$ I+ c
如果是细胞系的代数没有超过30代，那么传代过程中可能死亡细胞比较多，主要原因可能是细胞比较脆弱，还没有完全适应体外培养的条件，楼主下次传代的时候如果用胰酶处理，切忌时间不要过长，你也可是试试不用胰酶处理，机械吹打的方法；另外，扩瓶的时侯，可以2瓶传3瓶，或者3瓶扩4瓶，这样可以保证每个细胞培养瓶中有较多的细胞数量。

oucflora

补充一点，如果你的细胞没有建系，那么你在传代后细胞的培养上清中添加40~60%的旧培养液，这个旧培养液指的时传代前该细胞的培养上清。这么做的目的主要是为了防止生长环境的剧烈变化导致的细胞的死亡。另外，传代的时候不要更改培养基的种类，血清种类以及血清的浓度。

chenjiahuan

非常感谢！我的细胞是原代培养的细胞，于35皿中培养，细胞密度很大，连续培养了有两周的时间！出现了细胞复层的现象，个人觉得，细胞在同一皿里连续培养，不传代，是造成这一现象的一个原因。但是无论如何，传代的时候，该有细胞贴壁才对，但是我发现没有。又做了一批，感觉还不到传代的密度，不知道胰酶的影响是否很大，可否换成1型胶原酶？或者其它的什么酶？我刚刚开始接触角膜缘细胞，对它的脾气还不是很了解，我一般是每隔两天换一次培养液！我么培养液有专人配置，属于保密配方。传代培养，它们原来做过，效果也不好，不知到和这个培养液的关系大不大，不知道大侠用的什么培养液，我只知道现在的培养液血清含量比较低，但是可以去除原代培养中可能出现的成纤维细胞。

123jiaoyue

你说你培养的是原代的角膜缘细胞，你是培养的原代么做过鉴定么 原代培养的细胞做传代培养很难 我做过人角膜上皮细胞的原代培养 在你传代几次以后 你的细胞可能已经失去增殖能力 了再传代 细胞也会死亡

chenjiahuan

我做的是人角膜缘原代细胞培养，传代，传不下去，目前培养一个35皿，长满，复层，组织块法，需要两周左右，不超过两周。我上次细胞传代，感觉胰酶消化时间不长，显微镜下观察变形，即终止！领导说做过鉴定！
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yinjiqingqq

1.如果组织块有细胞迁出，说明和胰酶消化时间没有关系
( m, J! m: T' N! I  h  O2.你提到的角膜缘细胞培养时间2周，长成复层，细胞变大是因为有些细胞终分化为上皮细胞" p3 `# y2 |3 ?- K- Y
3.建议你在细胞成单层，融合度70%左右消化传代

yuhaoze

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能告诉我你的qq吗，我最近在培养角膜缘干细胞和角膜上皮细胞，想和你交流一下

silviant

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8 z1 Y) _( c/ I# Z9 ~3 Q你好，我现在也在培养角膜缘干细胞，你的细胞养得怎么样了？