求助：胚胎干细胞分化问题

hswu01

各位，想问一下，我养的JM8的干细胞在复苏后第一天状态还不错，隔一天就有分化迹象，培养基里加了lif，感觉就是细胞密度稍微密一点时就开始分化，滋养层用的是MAF，不知道怎么回事，哪位大侠给指点一下应该怎么调整一下？

zpzp0312

MAF？$ V8 d5 C; J# @. G; q6 v/ Y3 y
adult？

hswu01

回复 zpzp0312 的帖子$ h8 \, T0 a6 e) E
" S( c- a! n# t& J% H; N/ j% J7 Z
不好意思 打错了 滋养层用的MEF

yeya

多传几代试试看……从六孔板到6cm扩的时候也多传几代……还有啊，MEF是几代的啊，不要太老的……

hswu01

回复 yeya 的帖子
# D, Y/ }8 Z# F6 c/ F3 K+ R( z1 k/ G! l" R  ^, b! L
恩 MEF代数有点高，是第六代的

zpzp0312

我觉得应该是细胞自身问题* g3 M3 Y6 Q" n7 O% Q; \# S% ?
饲养层即是第六代，只要立体感较强，对ES细胞培养来说不会产生影响3 n1 S# B6 h, o& j9 q
建议换细胞
6 {1 C# e7 |* Y0 _或者低密度接种看一看是不是ES细胞的问题，或者适当提高饲养层密度试一试

chliu

建议铺稀一点试一下，如果不行，可能是细胞本身不太好，有分化倾向

hswu01

我们之前做过一次对照，就是按照正常密度和1/2正常密度铺下的滋养层，感觉效果都差不多。可能就如zpzp0312 说的是细胞本身的问题，谢谢各位的建议！

song1978

6代的MEF我觉得应该是不好用了。
1 M% P  ^' S, {$ A# G通常我们只用4代以内的...

hswu01

回复 song1978 的帖子: j2 d# _8 w" s7 P' m4 h0 h
6 U. q* T: o! i" u$ B
对 比较好的MEF代数一般是3-5代，但是我培养基里加了1000x的lif，还是出现分化