神经干细胞培养过程换液问题？

dragon513

请教大家一个问题，我以前做MSC的。现在老板让做NSC，看了些资料，不太懂，里面提及原代培养时细胞是悬浮的神经球（floating neurospheres），有的说2天换液。我以前做的是贴壁细胞，悬浮培养时细胞换液怎么换呀？直接换肯定把细胞吸走了呀，每次都收集培养液离心后再用新鲜培养基悬浮接种？
* g; M- I* R9 a2 ~! H0 M: _- u    我做MSC肯定没问题，做NSC真是个菜鸟，恳请做NSC的兄弟姐妹给点提示呀？

get0715

悬浮细胞换液一定要离心呀，去掉旧培养基，在用新培养基重悬，吹打成单细胞悬液，继续培养就可以了。

iseeyou1210

you can centrifuge when the neurosphere is small (day1-3).
- k0 k: J* y: \; M! _5 a# }2 {when neurosphere is big, you can transfer the culture to the 15ml faclon tube and let the neurosphere sitting down and then change the medium.

李1二

我查到的资料有的是静置十几分钟后半量换液，而有人认为吸弃的话可能影响细胞获得率也可能NSC会自分泌一些对其生长有利的因子因此在换液时只加入不吸弃可能更适合NSC。在传代时再离心。资料所述，我还没试过。

dragon513

谢谢各位，学习了。我向某公司技术支持讨教了下，他说必须得离心才行，一般3-4天就传代了，就传代时才用换液，细胞球沉到底部的细胞不能要，已经分化了。与大家分享下，但不知道这个说法对不对？还有适宜的离心转速和时间应该也比较重要吧，各位用的什么条件？懂的请指点一二，谢谢！

daviegao

centrifuge at 100g,1m,which is ok for 2-3 NS of E13.5 NSC

daviegao

supplement: 2-3d Neurospheres of P-0.

dragon513

回复 daviegao 的帖子8 h/ z. [$ q+ w/ L7 O

+ t7 t7 E$ u0 k3 I* ]100g， 1min ？哦，是否是细胞形成球形了所以很容易被离心下来？那在原代分离NSC过程中，组织消化过滤后用PBS或基础培养基清洗细胞用的转速是多少呢？MSC有人用1000rpm, 10min. NSC呢？

daviegao

Basically,collect the nerurospheres in a 15ml tube then centrifuge 100g for 2min,that is all. replace the meduim and then passage.

shengxiaqq

回复 get0715 的帖子
1 d  W7 r4 {1 z8 `8 x8 v8 b% h3 @  `0 B& K
对于干细胞换液是否需要离心的问题我有疑问，离心后是所有细胞都会离心到管底，包括一些分化了的和死亡的细胞以及一些细胞碎片。我觉得还是在离心管里面静置一个小时左右，换半数到大半数液体才好点啊。个人觉得更加不应该吹打的