支原体检测

牙牙丫丫123

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7 Z3 J' b1 I  b( B
3 K- g5 i+ P7 a5 J3 C3 T我们用的只是普通的PCR，可是每次结果都不稳定……
, {% m& Q& |+ S: d& ?  w$ m) j

youtellme

建立个人认为:
& q! d3 o' i* Z% g) `+ D9 d/ l* t) L: i1现在有专门检测支原体的试剂盒，做个出判断还是可以的。3 M0 m+ W- B* M1 J
2发现阳性了如果还想做的好点就PCR吧。方法自己选看目的了。
: F' I8 a, P% H; v3 z3通过荧光检测。0 ~4 B3 T2 {9 X6 y- f8 Z. F8 P
4平时看看细胞生长状态有个大致的判断吧。

wang3033

1.一般采用PCR检测支原体即可，一般不会有假阴性，有可能会假阳性，" v. X! B9 o6 c
2.电镜，将细胞培养基上清离心，收集沉淀，电镜看到支原体颗粒是最可靠地，沙斯爆发时，由于洪院士电镜下看到病人肺部细胞中存在支原体，导致非典病因是病毒或支原体争论！最后由国外学者电镜看到病毒，并测序鉴定到非典病毒

wwwert

goodboy 发表于 2011-8-8 14:27 * z% r5 o* ^* \. ~
回复 wwwert 的帖子/ V  L" Z) W) Q; k7 h3 P9 J2 s  @

! \% K9 ]/ p  A6 z0 k* C7 k能分享一下你们实验室的protocol吗？

& u$ |  I/ x) V+ V+ P$ F我们用的这个引物6 S5 Y& {( V7 J5 Y( a6 _, Q* S
For: 5' GGG AGC AAA CAG GAT TAG ATA CCC T 3'5 R# x) I; g: x4 {+ T6 q9 u5 N! B
Rev: 5' TGC ACC ATC TGT CAC TCT GTT AAC CTC 3'
7 u* I8 a6 k! L( \. PProduct: 280 bp1 Q# ]2 W' W8 i0 f' @9 C# d
35个循环,
) h3 T) v& u# p- q) g3 @, `! ?, T大约50ng模板,用kit提的,比较纯/ z4 ?0 v8 U( a+ `# i/ O+ `! k7 G# J6 a

. m" J. }$ f! J. T3 q" m

kosmos.y

支原体分子生物学检测方法有基因探针和聚合酶链反应（PCR）等方法。基因探针的核酸杂交法，虽然敏感性和特异性都很高，但基因探针常用同位素标记，放射性危害大，设备要求高且繁琐难以推广，近年来发展的PCR技术，使得支原体检测变得简便、快速、敏感、特异。

goodboy

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" I' w3 ~" I' `5 g! w
8 W+ f. D; b! S; q你们提的是RNA 还是基因组DNA啊？不知道你们的引物扩增的是那个片段

wwwert

goodboy 发表于 2011-8-17 14:56
0 ~# T- n8 I/ V回复 wwwert 的帖子) Q' s& W7 Z8 X8 F' `: B
6 s; K, H' i2 F6 k
你们提的是RNA 还是基因组DNA啊？不知道你们的引物扩增的是那个片段

# B4 B% a; s& B, u" o4 X, \; cDNA
6 d' |; N' d. X2 ?4 ?, I应该是扩增核糖体RNA基因的

goodboy

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7 f; _7 B6 S+ `# e1 g& y
' e# N5 w4 V! ]xie xie