支原体检测

牙牙丫丫123

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/ w* `9 I! \: i; @9 @( S7 }/ I' J- G. z
我们用的只是普通的PCR，可是每次结果都不稳定……" W& T4 }' w9 q- B/ B9 e

youtellme

建立个人认为:
0 S5 P. P  @+ f  r1现在有专门检测支原体的试剂盒，做个出判断还是可以的。7 h6 \' `" ]! W
2发现阳性了如果还想做的好点就PCR吧。方法自己选看目的了。
/ e& C- g" p# b, |% x# W: }0 [3通过荧光检测。
2 p( l: W; @. a4平时看看细胞生长状态有个大致的判断吧。

wang3033

1.一般采用PCR检测支原体即可，一般不会有假阴性，有可能会假阳性，! _3 ~, @/ O; S1 }( r6 l$ ^1 n
2.电镜，将细胞培养基上清离心，收集沉淀，电镜看到支原体颗粒是最可靠地，沙斯爆发时，由于洪院士电镜下看到病人肺部细胞中存在支原体，导致非典病因是病毒或支原体争论！最后由国外学者电镜看到病毒，并测序鉴定到非典病毒

wwwert

goodboy 发表于 2011-8-8 14:27 1 L2 ?: Z% B4 ]
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, v4 H9 S1 W+ B- |& Z1 \7 h7 H9 U6 c9 }4 G5 G! ^9 ^! x$ P
能分享一下你们实验室的protocol吗？

$ Q6 }/ [5 \% I5 Y% h/ }我们用的这个引物. o) A6 e6 |% j
For: 5' GGG AGC AAA CAG GAT TAG ATA CCC T 3'  j% b6 w7 a3 g
Rev: 5' TGC ACC ATC TGT CAC TCT GTT AAC CTC 3' $ d# D- i9 d5 Z( ^* E
Product: 280 bp
5 n5 ?; P. H, M" V* a35个循环,
8 k% B& ^9 e! z6 D大约50ng模板,用kit提的,比较纯
/ v& G8 C/ _# ]) V" p4 p  e. {$ a0 d4 g( L: y0 }3 Z2 V2 Y

kosmos.y

支原体分子生物学检测方法有基因探针和聚合酶链反应（PCR）等方法。基因探针的核酸杂交法，虽然敏感性和特异性都很高，但基因探针常用同位素标记，放射性危害大，设备要求高且繁琐难以推广，近年来发展的PCR技术，使得支原体检测变得简便、快速、敏感、特异。

goodboy

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& d4 ^3 {: k( a( _5 Y0 G* }' a- z" {
你们提的是RNA 还是基因组DNA啊？不知道你们的引物扩增的是那个片段

wwwert

goodboy 发表于 2011-8-17 14:56 7 w3 e$ x$ E: I! ]1 P& r
回复 wwwert 的帖子0 Q- `: G/ A6 g% P

8 H: E8 Q+ b! f0 _( E  e. \你们提的是RNA 还是基因组DNA啊？不知道你们的引物扩增的是那个片段

- G* ~( F& i% K- b) T
DNA
: X4 ^4 t* P( V' ]4 @6 ^+ [应该是扩增核糖体RNA基因的

goodboy

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3 h* M) y2 _0 t0 g8 E% I. i
0 B! F% {6 O# d3 Sxie xie