有关胞内pH值的测定

vivian303

如题，求解

johnnymmzhrt

可以采用对pH值敏感的荧光染料BCECF AM测量活细胞内pH值

johnnymmzhrt

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* w3 _3 k0 T' i. W' i
5 E1 W8 A: m3 xBCECF AM是一种可以穿透细胞膜检测细胞内pH的荧光染料。BCECF AM没有荧光，进入细胞后可以被细胞内的酯酶剪切形成BCECF，从而被滞留在细胞内。BCECF在适当的pH值情况下可以被激发形成绿色荧光。最大激发波长和发射波长因pH的不同而有所不同，最大激发波长大致在503nm左右，最大发射波长大致在520nm左右，实际检测时推荐使用的激发波长为488nm，发射波长为535nm。2 z' z" S# p( D$ c
1 用HEPES制备细胞悬液，细胞浓度为4×10七次方个/mL。
& i0 O4 H& J* a) y) d! C2 将1mM的BCECF, AM/DMSO溶液加入细胞悬液中（细胞悬液的1/300体积），BCECF, AM终浓度为3μM。0 v, y+ Q7 f, Q3 l7 V/ E; D
3 在37 oC培养30分钟。
  T' `2 ]: ~# E( F4 q) ~4 用HEPES缓冲液清洗细胞3次，制成3×10六次方个/mL的细胞悬液。2 d4 b! N/ G4 Q  Q$ Q
5 使用荧光显微镜或带有图像分析系统的激光共聚显微镜检测细胞的荧光强度。

johnnymmzhrt

回复 vivian303 的帖子# b8 i1 e7 L/ U4 {+ o% H
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注意染料操作时做一些适当的防护 毕竟对身体没好处的 还有就是有淬灭问题 避光低温保存