原代MEF消化

dongxin

我用过以下方法制备，效果很好！仅供参考
8 S7 \0 ]: t+ c# k9 D" G原代MEF的制备
' r3 l  ?8 T3 g" n( R8 K9 {- C（1）        将孕鼠断颈处死，取出子宫；
: j& C! i& ^: Y% v" p( F* F（2）        将含有胚胎的子宫置于干净的100-mm培养皿中；
( l4 S, z0 }& ], a, k（3）        将子宫用PBS清洗三次，去除血迹；8 U+ e) e* J! |, O; F& g
（4）       分离胚胎；  S& Y8 P% r2 S; i2 s
（5）        用镊子先去掉小鼠的头部，四肢，接着去掉肝部；
/ w" B- f; p' H% a8 y（6）        清洗胚胎，去除血细胞；
; g# o% x; |3 y( i0 h1 o/ ?（7）        用剪刀尽量将胚胎组织剪碎，约10分钟；
! O& G! ?1 ^9 I* t6 X（8）        用 0.05%胰酶消化组织约3分钟，吹打5-10下；3 C9 }7 I8 U" T( R4 f$ \; m
（9）        用 MEF培液终止并吹打组织块；# ]1 [. o0 x6 i
（10）        用70um滤器过滤；
; T+ a. {; P5 y% H4 O+ w8 E, N（11）        离心，铺于适当培养皿中，一般1个胚可培养一个35-mm培养皿。
/ F+ V& x* \" m3 V1 O1 a

123jiaoyue

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, A$ |" s7 y: Z7 }. O8 R' h" h* ~- c# A) b
那你选用的其他的酶 是什么酶呢

123jiaoyue

回复 OBGYNob 的帖子8 K3 b. M) r' \: u; u7 ?8 S. i
7 @* U! G0 h3 y; g4 E# O+ s
貌似是这样的，加入3倍的培养基后，组织悬浮起来，细胞会慢慢沉降，然后贴壁

sizhengliu

我直接剪碎胚胎（剪成糊状就基本可以了），然后均匀铺在瓶壁上。一般第二天就有细胞爬出。

nibirucome

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% t! d  j+ C  M, r' V$ P, R) d2 L
直接剪碎？没有消化的过程吗？

sizhengliu

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, b! \, p8 ]7 D2 F9 Z6 i5 J6 v' B9 H4 P! A* |' O
我没有试过用酶消化，不知道它们之间的比较情况，如果你做这个对照实验，可以告知下结果吗？

OBGYNob

回复 123jiaoyue 的帖子1 @2 Y& b* ^& S* O7 l
7 N" G$ M1 j, u1 U
那得多久啊...文献上不是说换液的时候要把浮起来的组织吸掉吗？我都养了一个星期了，没有东西爬出来...天啊！！！

zhlqlkpc

16小时了，爬出的很少，24小时要换液，怎么办啊？

zhlqlkpc

16小时了，爬出的很少，24小时要换液，怎么办啊？

zhlqlkpc

16小时了，爬出的很少，24小时要换液，怎么办啊？