原代MEF消化

dongxin

我用过以下方法制备，效果很好！仅供参考
( W: ]) o6 ^* G( v1 d6 c' e原代MEF的制备3 W* l$ s% k6 W
（1）        将孕鼠断颈处死，取出子宫；
3 h4 z" V" @; u) Y# V. I# {（2）        将含有胚胎的子宫置于干净的100-mm培养皿中；
1 p+ p8 K9 o& Z) r; a2 h6 v（3）        将子宫用PBS清洗三次，去除血迹；
: [6 `3 v" F" L- Y* d（4）       分离胚胎；5 ]+ y" L6 Y+ |) Y
（5）        用镊子先去掉小鼠的头部，四肢，接着去掉肝部；
4 d. p+ z6 K5 L0 m5 ?; M9 j8 p4 l（6）        清洗胚胎，去除血细胞；! H3 Y0 p# U/ {, ]- P7 ^: |1 a
（7）        用剪刀尽量将胚胎组织剪碎，约10分钟；9 r8 ~" y9 M$ d1 R4 F, r
（8）        用 0.05%胰酶消化组织约3分钟，吹打5-10下；" X0 ]3 e; p$ g
（9）        用 MEF培液终止并吹打组织块；
+ p% ?+ N( D- h（10）        用70um滤器过滤；
3 k+ t' V+ F. h/ }（11）        离心，铺于适当培养皿中，一般1个胚可培养一个35-mm培养皿。  O9 u8 g. Q  p( V

123jiaoyue

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/ Y9 N+ Q! s; [! Y+ r( X0 |; T& T  V& l: i. n8 p
那你选用的其他的酶 是什么酶呢

123jiaoyue

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% g0 w; z1 l. m  v2 ]# X5 P; K1 E
貌似是这样的，加入3倍的培养基后，组织悬浮起来，细胞会慢慢沉降，然后贴壁

sizhengliu

我直接剪碎胚胎（剪成糊状就基本可以了），然后均匀铺在瓶壁上。一般第二天就有细胞爬出。

nibirucome

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) w" |' ?* f! q" ]& t# H$ F! a& V; E6 m' k
直接剪碎？没有消化的过程吗？

sizhengliu

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, u( b6 E3 p& F2 |
, z/ i& k9 [; P4 r3 A我没有试过用酶消化，不知道它们之间的比较情况，如果你做这个对照实验，可以告知下结果吗？

OBGYNob

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* ?3 {0 `/ b: e, y- a3 k( w2 f" p
那得多久啊...文献上不是说换液的时候要把浮起来的组织吸掉吗？我都养了一个星期了，没有东西爬出来...天啊！！！

zhlqlkpc

16小时了，爬出的很少，24小时要换液，怎么办啊？

zhlqlkpc

16小时了，爬出的很少，24小时要换液，怎么办啊？

zhlqlkpc

16小时了，爬出的很少，24小时要换液，怎么办啊？