请高手指点一下，不胜感激

black

回复 luoziwei 的帖子" k# |/ p/ y  r0 W
- G3 u3 M9 M% j. P
我是按照10的6次方种的细胞，镜下观察已经是密密麻麻的了，如果再增加一倍体积的话，细胞会不会太密而影响生长啊？

1301918986

恩，我觉得应该是密度不够

luoziwei

回复 black 的帖子
2 i9 g9 f3 m) R  D/ l3 V' ?2 R
' w2 O- g: v# `2 N9 R* A7 @如果是2、3天后贴壁变成密密麻麻的话，那就没必要增加体积。否则还是要加大密度的，骨髓液里面包含大量的杂细胞，如脂肪粒，3种血细胞，或者破骨细胞等等。你想一下啊，10的6次方接种的话，按照0.01%的比例算算，1ml也就才100个MSC啊。

black

5 t% Z7 y+ c7 C# G, V2 B; Z
5 k/ Z) Q$ p# p4 M  b' ~+ k
这是首次换液三天后的照片，已经培养第9天了，请各位高手帮忙看一下是怎么回事？( @- P5 N# ]8 G) r1 y$ g
. I8 T3 G! T& U. e2 O) t& G
这是另外一瓶的样子，请问是什么原因造成这样的？
) `* U* M. R" e& B
, d4 z1 ]+ t, h3 q/ H, K这是另外一瓶的样子，请问是什么原因造成这样的？
, W( o& b! D  l. z9 D

仁心-妙术

干细胞原代培养难度大（1）细胞密度难以控制，杂质细胞数目多，纯化困难（2）合理控制血清浓度，避免发生老化（3）换液时间，需要一定经验。密度大了换液要勤，密度小时间可以延长（4）细胞活性相对细胞数目对细胞增殖的影响更大----个人经验：处于对数期的细胞，增殖能力很强，未消化的细胞哪怕是十几个也可以长满瓶子。老化的细胞即使达到70-80%融合，也很难增殖，甚至凋亡。（5）细胞融合是指局部的克隆而不是相对整个瓶底面积，局部长满80-90%就要传代。不要放弃，我原代的细胞数目也很少，10天了才长出几十个，但扩增的非常快。

black

回复 仁心-妙术 的帖子% m! e1 q& {6 b

, D2 x. Z/ H1 O请问你原代一般养多少天开始传代？

仁心-妙术

回复 black 的帖子' G$ b7 J5 P5 i8 D4 E# f

. z0 U2 @' u  `$ O4 `1 _原代长到80%-90%融合就可以传代，时间与血清浓度、细胞密度有关，我用了大约20天（担心细胞长不出来，血清浓度偏高所以速度较快），我实验室另一位的原代用了一个月。

chengde266

回复 black 的帖子
/ {5 U/ U4 A/ u4 l- I' j3 ?
; m; g3 K: S2 P% U. Q; O杂细胞在以后的换液和传代的过程中可以慢慢去掉。7 G# h: C6 m1 `* r
但是首次换液24小时，我们没有做过，都是三天左右。我觉得，细胞贴壁、增殖都需要一个合适的细胞密度。# W; s+ i: u4 G# Q* b, {2 J
你可以试试，三天半量换液，把弃掉的培养液再种瓶，你会发现还是有干细胞长出。

wangweilie0418

            骨髓中的MSC量本来不是很多，首先要保证足够量的骨髓，我们做人骨髓的一般会取80至90ml，再就是提取的过程，吸取白膜层时不要吸入过多的分离液，这样会使细胞的纯度降低。首次换液时24h换液是没有问题的，原代培养生长速度慢，我们的一般十天左右传代，所以你再看看吧！