贴壁培养的EB如何消化成 single cell？ - 胚胎干细胞专区干细胞之家

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查看: 14986\|回复: 6	go 贴壁培养的EB如何消化成 single cell？ [复制链接]

jn808

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楼主

发表于 2011-8-22 12:50 |只看该作者 |倒序浏览 |打印

如题！急，急，急啊！请问各位专家贴壁培养的EB用什么酶既能将EB消化成单个细胞且对细胞活性影响又小？

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bllx58

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沙发

发表于 2011-8-22 13:37 |只看该作者

胰酶，没问题啊

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starlight

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藤椅

发表于 2011-8-22 14:26 |只看该作者

我是结合文献上的做法，先用0.25%的胰蛋白酶消化1-3分钟，再用0.1-0.2mg/ml胶原酶I或II 37度消化半小时，每10min轻柔吹打一次；胶原酶消化时放在50ml管子里在摇床上37度消化也试过，效果还可以。感觉胰蛋白酶消化时间不能过长，否则对细胞损伤太大，希望对你有所帮助

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biovictor

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板凳

发表于 2011-8-22 22:03 |只看该作者

我则是通过降低胰酶浓度0.05%来对ES或者EB进行消化，并伴随机械力轻轻吹打，效果也可，影响不是很大。

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dongxin

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报纸

发表于 2011-9-6 15:33 |只看该作者

使用0.25%Trypsin-EDTA消化5min，再借助移液枪的吹打（温柔些），可以尝试。供参考，祝好运！

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yangqiurui

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地板

发表于 2011-9-14 23:19 |只看该作者

我们用accutase，还有几种其他损伤小得酶，记得有一种叫做liberase，这些东西自己肯花脑筋找很容易就出来了

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梦想lab

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7楼

发表于 2011-10-13 16:58 |只看该作者

EB为什么要贴壁培养呢？

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