有关tumosphere培养的问题

rockysofar

请问做肿瘤细胞无血清球体培养的朋友. k1 J" ^3 M% ]2 q7 ^+ u5 {
1在超低吸附六孔板中，每孔接种多少细胞？5000-20000个/孔？？？) ~0 k. Z1 N( v2 E5 O
2是不是都是隔天加入EGF 或者/和bFGF？？还是细胞接种之后就不再换液一直等到7天收集球体了？？？

饶冠华

rockysofar 发表于 2011-8-22 16:53 # O- t) Y% u" `" D' J5 p, x
请问做肿瘤细胞无血清球体培养的朋友- n/ n& Q0 s5 c" F2 `/ K  `, V' q
1在超低吸附六孔板中，每孔接种多少细胞？5000-20000个/孔？？？
! G+ C/ o6 [) |+ e2是 ...

7 x* p! h8 K2 S* r8 }# A5 R$ t不同肿瘤接种的细胞数目不太一样，一般从200~10000/ml的密度都有，如果细胞系的话，用的细胞数目就少点，如果是原代的肿瘤，用的细胞数目就多点。这个要靠自己的经验总结。
0 {6 f2 n$ J% B$ Z/ }0 l0 y6 H关于生长因子，我是每三天加一次。一般sphere可能要2周左右吧，soft agar 也差不多。

rockysofar

我做的是细胞株。还有问题请教一下
' p9 r) E( k. v  B; T6 ?那如何区别细胞粘附成团 和 球体呢？
9 L8 V, p) Q* f6 P( o还有你每3天加入生长因子，是直接把生长因子加入到6孔板的每一孔中，并不换液么？还是直接换液？？

饶冠华

rockysofar 发表于 2011-8-22 19:03
. a4 |' R- g7 I" Q% }2 f我做的是细胞株。还有问题请教一下( L, [1 F! q* F# ~  s. D! D- q
那如何区别细胞粘附成团 和 球体呢？4 n5 u9 r- y2 R8 C) Y$ `
还有你每3天加入生长因子，是直接 ...

# \, C- ?5 U! ]% s/ U每周换一次液  你可以看看培养液消耗情况  一般来说 几百个细胞消耗不了那么多培养基

amosummer

回复 饶冠华 的帖子6 y. Z; U, G0 `

, M2 m; Y$ V$ X4 N请问下sphere 如何传代呢？用胰酶消化会不会对细胞活性有影响啊！

山羊

影响不大。0.05%胰酶，室温。我们就是这样的。

rockysofar

版主在请教一下，在开始几天培养的时候，细胞都聚集成团，你会去轻柔的吹打，使细胞分离么？？  b) B, K1 l2 Q

一枝独秀

要想真正区别细胞粘附成团 和 球体，我认为最有效的办法是在96孔超低吸附板进行sphere培养；其次，可以试一试soft agar