j角膜缘细胞的分离培养

chenjiahuan

最近取得的角膜材料很小，不过都是医生取好的，有的沾到眼科镊子上就看不见，做的时候，夹出来，在血清里沾一下，接到培养皿上，在超净台里吹一会儿，再补加培养液，加过培养液后，发现组织块是贴壁状态，可是第二天看的时候就票起来了，然后又把它取出来，重新回接，见不到迁移出的角膜缘干细胞，很着急！同时稍微大一点儿的组织块，在0.05%的胰酶中消化不超过两分钟后，眼科剪剪碎，接到培养皿中，也是刚刚加入培养液时，组织块不漂浮，第二天有组织块儿漂起来，有很少的一部分还贴壁！但是也没有见到迁移出来的细胞，不知道该怎么半？我的稍微大点儿的组织块也不会大过小米粒，原来也做过不佳胰酶，直接剪碎，壁培养的，前段儿时间都能长出细胞，这连续四例有组织块儿漂起来，很着急！还请各位给点儿良药

oucflora

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你说“接到培养皿上，在超净台里吹一会儿，再补加培养液，加过培养液后，发现组织块是贴壁状态”其实这时的组织块并没有贴壁，只是简单的吸附或者沉落在培养皿的底部而已，将培养皿转移至培养箱的过程中，培养液的流动，可能已经使组织块漂起来了。
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原代培养采用正置的组织块法来做的时候，组织块接种到培养器皿上后，滴加少量的培养液，在培养箱中静置6-12h让其充分的贴附，之后再补足培养液；培养液加入后，3天内不要去移动它；不然，组织块贴附不牢固，很容易漂。
( A3 H) S! T8 `$ x% \8 w7 W对于一些贴壁能力较差的组织块或者细胞迁出较慢的组织块，原代启动培养的时候，原代启动短期内组织块的贴附并不牢固，所以，这段时间内不要频繁的去挪动培养器皿。

chenjiahuan

谢谢楼上的回答！再有材料的时候，按照楼上说的做！但是还有个问题，如果角膜缘细胞能长出来的话，今天晚上接种组织块，第二天去看，就会看到有细胞迁移出来！

chenjiahuan

谢谢楼上的回答！再有材料的时候，按照楼上说的做！但是还有个问题，如果角膜缘细胞能长出来的话，今天晚上接种组织块，第二天去看，就会看到有细胞迁移出来！

chenjiahuan

还有连续传代细胞生长曲线有哪位做过？我知道每个代次的细胞，生长曲线如何去做，连续传代，各个代次细胞生长状况，在同一个曲线图中如何表示？