FUGW载体的启动子

daviddow

请教大家一个问题：( z+ |' W' [7 E5 q, A2 r/ g. ~9 `
我做载体FUGW的启动子，使用其他的启动子代替ubiquitin C启动子。请问，是不是下游的GFP只是受ubiquitin C启动子作用？GFP上游的其他启动子，比如CMV对GFP有作用吗？

runsong

我认为你的思路是可行的。5 J8 s0 o) i1 n' s, w1 G% m+ P3 U9 Z$ V
这个载体是可以自身沉默的。它包装成的病毒感染细胞后，由于truncHIV-1_3_LTR是U3区的突变体，不会在宿主细胞内以hiv的转录起始序列起始转录，即对下游的GFP无影响。  [+ a3 C1 b; g
至于你说的CMV，它的作用是在包装细胞内转录出病毒的RNA,不会进入宿主细胞。
" i  O0 d6 [. U+ m4 j' \' e) K
4 ?% W  [, R( b4 }  W一家之言，仅供参考。

fguw

I am wondering why you want to change promoter?( A( M, A7 n, z
P Ubiquitin C is a pretty strong promoter,3 j/ |! U$ P/ H4 _; B) W
前不久，听说该启动子在少量细胞中有活性很低，但是在很多细胞中活性应该都不错，

daviddow

我想研究启动子的作用，就用我自己的启动子代替了这个启动子，研究启动子。不知道可以不？

daviddow

我想研究启动子的作用，就用我自己的启动子代替了这个启动子，研究启动子。不知道可以不？

daviddow

回复 runsong 的帖子% q4 n8 n( `2 t+ g# `) F$ t

& }5 m# R' _% W  l! R谢谢runsong 了，提出这么好的建议。

menglong211

你好··我是一个初学者·现在刚刚接触慢病毒的构建·我用的是FUGW3这个载体··我想插入一段GFP~~我的测序结果是正确的·可是在包病毒的时候293T细胞转染12h还看不到荧光~~我不知道哪里出了问题·跪求啊·谢谢

细胞海洋

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* n* ~) B8 v/ B& w+ {  r2 j) _! B+ U( l2 F' J
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daviddow

你在哪里插入GFP呢？我知道FUGW本身是有GFP的

menglong211

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# X  r) ^& Z/ G0 h5 }
3 ~) G+ T4 [% w- e  y3 A我这个质粒是别人给我的·正好把GFP给切掉了·所有要自己再做··咕