有人养小鼠骨髓间充质干细胞并传过很多代的吗？

violet_sc

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$ S4 ~3 Y" C* ?: B( x- v
同样的疑惑，尤其是第四个问题，请问这些问题你有答案了吗？求解！

violet_sc

回复 asejon 的帖子, ?7 h3 R. L. R8 k2 C

* M. [# l7 p4 ^3 z& o9 a+ S6 H我在准备分离培养小鼠的BMSCs, 第一次做，希望能多学习些

live861215

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3 d, S# J( U3 B* L* h" b1 ]
8 ~! A& Q& k2 a3 T: x我现在做的是SD大鼠，刚开始做，我是用的是percoll液进行分离的，第一次没分离出来，第二次我配了1.090,1.077,1.067,1.055的梯度percoll分离，效果也不好，我每次用一只两周龄的SD雄性大鼠，能分享下你的经验吗？你采用的是什么分离方法。
% H* Z: f1 j6 S2 B2 i* N先说下我的方法吧：
6 c, U- `% }9 \首先准备两个培养皿，分别加入无血清低糖DMEM12ml与6ml；然后大鼠脱臼处死，放入75%的酒精中5分钟，取出后，取大鼠前后股骨放入第一个培养皿中，并去除肌肉，转入第二个培养皿中，再用5ml的注射器吸取培养基冲洗骨髓，再收集第二个培养皿的细胞悬液于离心管中，1000 rpm离心15分钟，去上清，加入1ml无血清培养基重悬细胞，再在另一离心管中分别加入梯度percoll液（由离心管底部至上分别是高浓度到底浓度的percoll 2ml），最后将1ml的细胞悬液加在percoll上，3000rpm离心25min，出现一层乳白色的薄层，用1ml的移液器吸取这层细胞，将其加入到一新的细胞培养盘里，加入10ml含10%FBS的低糖DMEM中，于37°，5%的二氧化碳培养箱中培养。
% q- z' A- ]" W$ d2 \4 @7 X希望指教！

细胞海洋

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wujh1986

我们养的小鼠的BMSC一般都到五代了啊，小鼠要选择周龄小的，四周就可以了，可用密度梯度离心啊，αMEM+10%FBS。MSC不能用高糖培养基，易分化

sysuhoo

就我们实验室养小鼠MSC的经验来看，小鼠的确实最难养，比人和大鼠的都难，但是也不是完全那么难。相对于人和大鼠来说，血清和培养基对小鼠MSC的增殖都不是最关键的，我们实验室比较过进口的和国产的血清，差异并不是十分大，而且现在一般都用国产血清来养，最多能养到20多代，而且在10代做分子表面标记都正常。其实我觉得对小鼠MSC而言，最关键的是细胞密度与细胞消化的控制，特别是在4代以前，一定要注意，要有耐心，不能贪进度和多。只要能过了4代，后面基本上就没有任何问题，一般像细胞系一样，一传3正常传代即可。

chengge21

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( t) ?" I+ `6 N' v" K& v; m% P: H: y. g3 e2 r
我觉得用DMEM培养基冲出骨髓后在过滤之前是不是应该用1ml针头吹打一下，毕竟很多细胞是成团块存在的，直接过滤的话会损失一部分细胞，个人建议。我做的是SD大鼠的骨髓间充质干细胞，效果不好，传代效果也不好。   还有我觉得巨噬细胞15分钟贴壁并不明显，骨髓里面的血细胞倒是应该注意去除。

cuizhuzhu

我现在才刚开始养！总觉得细胞的状态不好!可能是血清的问题！杂细胞很多！

dragon513

回复 jj.jianjia 的帖子, H1 o* P0 ?! e- s& L3 H9 v

, [7 A9 u8 a( [/ L+ y好的，谢谢分享！

dragon513

回复 illidancui 的帖子0 |! Q( A6 Q4 B) U

# g0 T$ _: A  ~6 D现在怎么样了？顺利吗？如果顺利能不能晒下方法呀？谢谢！