有关脐带消化问题

lidaifu001

leungyk 发表于 2011-9-16 14:29
, n  c' X2 s1 X$ i跟我們有聯繫的另一組人，他們是用胶原酶和透明质酸酶的，不過是分開消化. S- w: x$ J* d  r
首先最0.1%胶原酶1個小時 (棄掉 ...

# e9 L, n9 ]9 x# f
您说的对，提问者之所以结果不好，是因为胶原酶和透明质酸酶不能同时用，而是现用胶原酶消化后，在用透明质酸酶去粘的。

Tonypan

细胞比较粘稠很多时候是处理细胞时DNA泄露出来了。用100u/ml  DNase处理（注意一下DNase激活条件）会好很多

meister

粘性不是DNA引起的, u7 j2 F' f% c3 S6 K+ \
透明质酸酶使用应该后用
' @/ ^: d6 ~' A- I胶原酶对细胞损伤小，可以消化时间延长

havie

细胞液粘稠是DNA泄露引起的，用DNaseI处理即可: V' L7 Z2 a2 _1 e8 N
另外，消化脐带我们使用的是一型胶原酶

细胞干

偶用0.1%胶原酶消化40min，然后加0.25%胰酶继续消化30min，貌似效果不好啊，消化完液体很粘稠，很难过滤。8 B# t! J/ Q7 k9 U2 ~) e; R
能不能增加胰酶浓度或延长胰酶消化时间啊？

相文

透明质酸酶消化的时间是多长啊？浓度是多大啊？我怎么老做不出来，还有这些的ph要调吗？用什么调啊？

上帝帮我转运吧

回复 andylee824 的帖子1 Q6 \/ T4 C: t2 ?0 m6 ^

( f- |) |- w/ K) T* q1 w7 v8 A您好，我曾用2型胶原酶过夜（16h），组织全溶了，后来就四倍稀释离心。接种后也有贴壁变形的细胞，但是感觉很饥饿的样子，很细长，后来就不怎么长。我开始感觉是培养基的问题，后来发现用组织法做的就不是这个样子。我想问您那过夜是多长时间？组织都溶了吗？稀释几倍离心？有过滤吗？谢谢，多给新手指教

andylee824

过夜是不超过12小时；一般情况下，如果你剪的足够碎的话，会全溶解的；稀释10倍离心；用筛网过滤后种瓶。