有关脐带消化问题

lidaifu001

leungyk 发表于 2011-9-16 14:29 4 Y. c1 L6 P# W. Y0 U/ b  T
跟我們有聯繫的另一組人，他們是用胶原酶和透明质酸酶的，不過是分開消化
! U1 w0 [5 R4 f7 z首先最0.1%胶原酶1個小時 (棄掉 ...

" V, i7 A1 {# j+ k( X6 r: {您说的对，提问者之所以结果不好，是因为胶原酶和透明质酸酶不能同时用，而是现用胶原酶消化后，在用透明质酸酶去粘的。

Tonypan

细胞比较粘稠很多时候是处理细胞时DNA泄露出来了。用100u/ml  DNase处理（注意一下DNase激活条件）会好很多

meister

粘性不是DNA引起的
+ z3 m, m1 f9 u$ I透明质酸酶使用应该后用! f( N  x' j7 m
胶原酶对细胞损伤小，可以消化时间延长

havie

细胞液粘稠是DNA泄露引起的，用DNaseI处理即可
5 v% [) |9 V7 o" |9 {另外，消化脐带我们使用的是一型胶原酶

细胞干

偶用0.1%胶原酶消化40min，然后加0.25%胰酶继续消化30min，貌似效果不好啊，消化完液体很粘稠，很难过滤。
& w7 ~* U3 ?* x; n7 f' p" A能不能增加胰酶浓度或延长胰酶消化时间啊？

相文

透明质酸酶消化的时间是多长啊？浓度是多大啊？我怎么老做不出来，还有这些的ph要调吗？用什么调啊？

上帝帮我转运吧

回复 andylee824 的帖子
8 m6 k% z( S6 R, H* y* k0 o5 Q- B; l  O6 U. ?4 q; b7 ^8 q) j; a, k
您好，我曾用2型胶原酶过夜（16h），组织全溶了，后来就四倍稀释离心。接种后也有贴壁变形的细胞，但是感觉很饥饿的样子，很细长，后来就不怎么长。我开始感觉是培养基的问题，后来发现用组织法做的就不是这个样子。我想问您那过夜是多长时间？组织都溶了吗？稀释几倍离心？有过滤吗？谢谢，多给新手指教

andylee824

过夜是不超过12小时；一般情况下，如果你剪的足够碎的话，会全溶解的；稀释10倍离心；用筛网过滤后种瓶。