有关脐带消化问题

tkpss18

请问有没有人是用透明质酸酶和胶原酶来做脐带消化的？' z, z! A0 r5 t( ^! L
我们实验室的实验做出来的结果不好。+ @' v6 T$ R2 Q  F' \# T7 o
我们是用0.1%胶原酶和0.05%透明质酸酶消化1.5小时。
& V0 `9 l4 B7 f% d7 }请问有没有高人可以指点一下？
& a7 S, q3 q( h  [: m& \, T还有我想问透明质酸酶你们是用那一家的？
/ _! g2 P; w! b' m0 y; P1 `谢谢各位的帮忙。

andylee824

我们都是用二型胶原酶（GIBCO） 0.05%，个人认为胶原酶浓度不要太高，对细胞伤害太大；还有脐带要充分剪碎，过夜就可以了。不用透明质酸酶

1301918986

回复 andylee824 的帖子
9 ~$ n4 M$ e& ^. ]! e/ J8 w2 ?, X( O0 T0 p  p1 ?
你好，请教一下，我们用二型胶原酶消化过一次，消化过后感觉脐带都消得差不多了，结果液体太粘稠了，根本离心不出来细胞，不知道是什么问题？

dragon513

胰酶和二型胶原酶消化更多点，有单用一种也有两种合用的。胰酶浓度不能太大，作用时间太长对细胞伤害挺大，胶酶伤细胞似乎作用不大。

andylee824

你说的“液体太粘稠了”，我知道什么意思了。消化后的液体，应该先用10倍体积的盐水稀释，充分洗涤。然后离心，2500 rpm,15 min.最后合为一管种瓶。你试试这个方法。

hwlightning

我之前也是用胶原酶和透明质酸酶，结果也很不理想* K% G! l3 J+ u! \1 t( R3 k6 r4 g+ T
后面我用组织贴壁法效果很好，细胞也挺纯，可能培养时间较消化长些，但是比较简单。可以试试。

leungyk

tkpss18 发表于 2011-9-15 11:44
0 B/ ?; ]. o# q8 J  F- j请问有没有人是用透明质酸酶和胶原酶来做脐带消化的？
3 L, Q% a  k6 R1 h我们实验室的实验做出来的结果不好。
0 o$ ^4 d3 Y# ^' P( @我们是用0.1% ...

& e2 a! z1 N* n- I9 [9 U1 x7 _
跟我們有聯繫的另一組人，他們是用胶原酶和透明质酸酶的，不過是分開消化
( \0 q+ I( S4 I% i首先最0.1%胶原酶1個小時 (棄掉)，然後再用透明质酸酶(sigma)' Z2 f, @5 R' o. J2 q# S9 z) q
他們的結果理想( P: V, }3 B) M1 k5 I1 B' @
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而我們，最近試了不同濃度的胶原酶(0.05%/0.1%/0.2%)，不同時間 (0.5/1/1.5/2 小時) ，初步結果: 全部都有MSC長出( e7 d  I& F" v& A2 H2 s
! ?! w3 u  X2 p9 Y

300000

谢谢各位大侠、学习了。个人建议还是不要消化，获得细胞数量较少。用贴块法较好。

tangyvhuang

我用混合酶消化的，效果很好的，楼主的比例是多少？就是组织跟消化酶的比例是多少?1:1还是1：2还是什么的？不管比例是多少，只要组织处理的足够碎，基本上都能消化的一点不剩。1.5h的话要是比例大的话也没问题也能消化干净，我为了省酶，基本上那个1：1,四五个小时吧。% K" |  \0 v, T, |& U
楼上的那个单纯用胶原酶的老兄，单一的酶消化之后，消化液肯定很粘稠的，离心离不出东西。一种方法就是大量稀释，10-20倍ns稀释后离心，另外一种就是加入其他酶。透明质酸酶是一种降低细胞间质的粘性的酶，中性蛋白酶是讲解胶原蛋白的一种酶，这两个酶都是降低粘性的，

tkpss18

谢谢各位提供的宝贵意见。
1 W7 i* Q: v4 o: A: W我用的比例是1:1的。可能跟楼上说的一样。。重点是要把脐带剪碎。
$ V- Z# Q$ }* K* b' \透明质酸酶用后是真的有效改善粘性的情况发生。
+ E6 q9 L# b* d7 L5 {* p8 w+ W( c9 S那我想问一下，消化完以后你们是用牛血清来停止消化然后再离心的吗？
# ?; M. A! j; s8 Y7 g* k谢谢~