有关脐带消化问题

tkpss18

请问有没有人是用透明质酸酶和胶原酶来做脐带消化的？( f) n6 l6 c9 Y
我们实验室的实验做出来的结果不好。4 F7 c3 v$ p- A  O
我们是用0.1%胶原酶和0.05%透明质酸酶消化1.5小时。
+ N$ j3 H! v" z+ _/ o; j请问有没有高人可以指点一下？' x. ^1 e2 b9 u- P9 g& E. A5 J' u6 R3 h
还有我想问透明质酸酶你们是用那一家的？
/ u) `( G& z$ k* _" S1 Y) N谢谢各位的帮忙。

andylee824

我们都是用二型胶原酶（GIBCO） 0.05%，个人认为胶原酶浓度不要太高，对细胞伤害太大；还有脐带要充分剪碎，过夜就可以了。不用透明质酸酶

1301918986

回复 andylee824 的帖子1 h1 P, t6 P# o
! A, o- W4 w! D
你好，请教一下，我们用二型胶原酶消化过一次，消化过后感觉脐带都消得差不多了，结果液体太粘稠了，根本离心不出来细胞，不知道是什么问题？

dragon513

胰酶和二型胶原酶消化更多点，有单用一种也有两种合用的。胰酶浓度不能太大，作用时间太长对细胞伤害挺大，胶酶伤细胞似乎作用不大。

andylee824

你说的“液体太粘稠了”，我知道什么意思了。消化后的液体，应该先用10倍体积的盐水稀释，充分洗涤。然后离心，2500 rpm,15 min.最后合为一管种瓶。你试试这个方法。

hwlightning

我之前也是用胶原酶和透明质酸酶，结果也很不理想
  r8 G- \5 l1 |1 i后面我用组织贴壁法效果很好，细胞也挺纯，可能培养时间较消化长些，但是比较简单。可以试试。

leungyk

tkpss18 发表于 2011-9-15 11:44 7 C0 j- k5 a- d0 }
请问有没有人是用透明质酸酶和胶原酶来做脐带消化的？( x# d0 B$ U/ A+ @" }3 i+ c1 S% a
我们实验室的实验做出来的结果不好。
3 g: E3 H/ j: t我们是用0.1% ...

* U* q/ M) p4 }+ E跟我們有聯繫的另一組人，他們是用胶原酶和透明质酸酶的，不過是分開消化( E2 W+ R) E5 }5 u
首先最0.1%胶原酶1個小時 (棄掉)，然後再用透明质酸酶(sigma)3 x0 H- N5 ~+ B! p
他們的結果理想8 T8 u8 f( U: e9 G9 B

) O+ g% R+ j! E4 B. O/ p2 C. u6 B而我們，最近試了不同濃度的胶原酶(0.05%/0.1%/0.2%)，不同時間 (0.5/1/1.5/2 小時) ，初步結果: 全部都有MSC長出
* F7 `* w! K% v9 n! T/ s2 C# Z; o/ }9 ^, _

300000

谢谢各位大侠、学习了。个人建议还是不要消化，获得细胞数量较少。用贴块法较好。

tangyvhuang

我用混合酶消化的，效果很好的，楼主的比例是多少？就是组织跟消化酶的比例是多少?1:1还是1：2还是什么的？不管比例是多少，只要组织处理的足够碎，基本上都能消化的一点不剩。1.5h的话要是比例大的话也没问题也能消化干净，我为了省酶，基本上那个1：1,四五个小时吧。
/ y2 X: m9 M/ }% j, h: f, m- G) f/ P$ [楼上的那个单纯用胶原酶的老兄，单一的酶消化之后，消化液肯定很粘稠的，离心离不出东西。一种方法就是大量稀释，10-20倍ns稀释后离心，另外一种就是加入其他酶。透明质酸酶是一种降低细胞间质的粘性的酶，中性蛋白酶是讲解胶原蛋白的一种酶，这两个酶都是降低粘性的，

tkpss18

谢谢各位提供的宝贵意见。
. H( x8 A9 u- h! P* Z我用的比例是1:1的。可能跟楼上说的一样。。重点是要把脐带剪碎。
! p2 V5 [1 x3 A/ j: ?" L透明质酸酶用后是真的有效改善粘性的情况发生。
- t& i% g2 _% s' e5 j. S6 u2 j那我想问一下，消化完以后你们是用牛血清来停止消化然后再离心的吗？
1 `9 ]: b4 R3 v+ ]& `6 T; `谢谢~