急求诱导胚胎干细胞分化为心肌细胞较好的诱导剂

jianghaixiang

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  f9 y# F. c7 y9 N. @# m6 w- K! J$ j# d+ L% a) c  U2 q5 v5 k
谢谢，但是我的诱导方法必须避免如bFGF等生物因子的介入，不知你是否有做过这方面，能不能提示一点相关的无毒的诱导率较高的诱导剂、诱导时间及其其用量等。

yibo10679

通过类胚体自发分化，有一定分化率
" e3 k$ Y% W: p# a添加DMSO也可以适当提高分化率，但效果有限，不稳定' y$ G: X+ j$ K1 O! Q& _  C
5-氮胞苷也可以试一试- J+ E$ q8 S3 `8 v9 H
再有就是细胞因子了，比如bFGF和BMP4等
0 k; H# q9 u" ?9 }% h) ?当然一可以考虑使用转基因的方法7 a7 o- W) u9 Q" F* ~3 \! o* {

jianghaixiang

回复 yibo10679 的帖子
! q) [0 H  C. G' q- Z2 |( D/ m
! j. s4 h- F9 ~/ s4 r6 d( ?谢谢yibo10679 ，自发分化率太低，然而DMSO和5-氮胞苷有毒性，而我所做的内容首先需避免细胞因子的加入，所以这些都排除了。我看到有文献说抗坏血酸有诱导作用，不知其作用如何？

xiaoyurly

完全不添加任何生物因子么？这个要获得大量的诱导心肌细胞有一点点困难，也比较难做到。
3 i) y5 m; N: E2 f1 D7 |0 u现在很多诱导方法都是在细胞因子诱导的基础上锦上添花的。
; k+ `: J2 B1 r, N- E其实5-aza效果还可以，毒性也不是很大，用于诱导的胚胎细胞基数大些也能实现。

jianghaixiang

回复 xiaoyurly 的帖子4 [( ~9 l4 E2 W4 i5 K
7 \0 v& H/ P1 j7 k5 {0 ~
谢谢！就是因为不能使用生物因子类，所以很为难。我用抗坏血酸试过诱导，很庆幸有心肌细胞的跳动，但是跳动时间维持不了多久，还有就是我觉得拟胚体的大小会影响心肌细胞分化的结果，因为个体比较小的拟胚体就没有出现心肌细胞的搏动。不知你们的结果是怎么样的？

xiaoyurly

拟胚体无需诱导也会跳动，不知你在诱导过程中拟胚体阶段多长时间？6 u' ~! L0 _, O: D9 J* e
我们一般只放2d，然后挑选较大的放到明胶盘里让其贴壁分化，一般到第10d（从诱导开始，包括拟胚体阶段）左右每个拟胚体都有跳动的区域出现。
' E* [4 O( R; @' F- Y个人经验，拟胚体阶段不要太长，否则心肌分化会被其他分化冲淡。" c% L5 I; i/ u+ F* ]
加诱导因子也是在贴壁分化开始之时。

jianghaixiang

哦，这个信息很重要，我也是悬浮了2d，但是诱导时间从加药处理开始算，你算出的10d是从悬滴的时候开始算的吧？对了，你是在细胞贴壁多长时间后加药诱导的呢？

chenjiahuan

你可以加点维生素C和五氮胞苷

jianghaixiang

回复 chenjiahuan 的帖子( {# J0 S; ^) }
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这个建议不错，我也想过这么做，只是怕诱导率不高没急于动手，等这批细胞长出来我试试，谢谢！

chenjiahuan

我原来做过，屡试不爽，先形成类胚体，再诱导分化！不加诱导剂组，一定时间后观察，也能看到节律性收缩现象，类胚体形成时间要久一点儿！