MSC的无血清培养效果如何

透明之蓝

回复 barley 的帖子% P+ X9 x- x% F  ]! W' s

& e3 O( q. G9 H  R: I! G本人使用过无血清培养体系，Gibco的CTS（AIM-V），还是有血清的对细胞生长更有利，细胞状态更好！因为有血清体系更加接近细胞的原始生长环境！但是，有理论显示：培养基的成分和血清中的其他成分会对干细胞的生长和分化有影响！这就是为什么大家建议用无血清代替有血清的原因，而且，提倡用a-MEM代替DMEM也是这个原因，前者成分较少，不会引起细胞分化等等。希望大家能够找到一些相关的文献分析一下!

barley

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  K# a$ R+ h: C  A" T
' y& m$ M+ O' r" e' m7 aaim-V是免疫细胞培养基还是stempro？

透明之蓝

回复 barley 的帖子1 \* p# K, p1 o8 `* o
; M7 x. s6 j, J" Z: X
是免疫的！我这里免疫和干细胞都做，所以写在一起了，现在免疫主要用1640+血清了，干细胞主要是DMEM+血清~

hawkyiger

无血清体系和有血清的体系培养MSCs的效果差别是有的，我同时用过两种对比过。无血清培养基培养的细胞偏细偏长，细胞之间有空隙，但增殖速率并不慢（用的是北京一家实验室自己配的SUS），且流式等各项指标和有血清的也没什么区别，只是在细胞长到80%左右就大面积脱落；有血清的细胞形态较好，且能长到100%还能维持较好形态甚至多层生长。因此在做无血清培养时，传代时密度要稀，另外要勤加观察。

lele

我正准备买gibco无血清培养基呢，他不好用的话，那用什么无血清的培养基啊？用过的同仁给提个建议

sijicc

回复 tingwuyu 的帖子, b/ p; m. T- w& C/ S: U2 ~
- A- t6 }4 y) c; p) F5 E  R  x
。。。你的培养技术有问题

zxmrose

我们家的有血清和无血清都长的挺好的，有血清长出来的细胞偏大和扁平，无血清的则较幼嫩。但是无血清培养出来的细胞传代到20代的时候发生过疯长，2天就传代了，细胞有可能变异了。还有就是gibco的无血清培养基是要铺基质才能长出哈。

zhang0194

贴壁没有血清的好，但是也挺牢靠的，一般72H 就能传代一次！量就是75的瓶子10ML！

forcat

tingwuyu 发表于 2011-10-29 09:47
& B: X# q# r# S用过stemcell和gibco的无血清，坑爹啊，都不长

9 q. _) s/ [: {* b- H7 ~
我比较过Gibco的stempro、Stemcell的Mesencult-XF和Lonza的CD无血清培养基。三种培养基培养效果都FBS+MEM-A效果好，不仅细胞形态更小更均一，而且细胞生长速度也非常块。细胞即使达到200000/cm2的密度从光镜下看都还有一些小的空隙。* S: H0 e, Z  y; Q
至于你说的长不好或者不长的情况，我相信你可能没有根据说明书。因为Gibco的stempro、Stemcell的Mesencult-XF这两种需要各自公司的干细胞细胞基质，加上500ml完全培养基，基本要7000元左右的价格，如果不加基质，细胞是长不出来的（这个非常重要），所以即使你铺一点gelatin都可以长得好，不过没有公司的基质优化的好而已。
' y+ Q" v/ u* X: {* x而Lonza的CD无血清培养基为化学限定培养基，按照抗体无血清培养基概念应该是最高级的一种无血清培养基，Lonza的这款培养基不需要预铺细胞基质，细胞一样长得很好。不过个人认为没有铺基质的ibco的stempro、Stemcell的Mesencult-XF培养的MSC形态好。还有个问题，就是CD培养基基（或者无血清培养基）不铺基质，细胞高密度容易大片脱落（细胞贴壁不紧）。2 v1 M3 c5 r& @& [5 p8 Y
所以大家如果不要求很高密度的细胞培养，可以使用lonza CD培养基，市场价格为3000元/500ml。当然，如果对血清没有要求，使用Stemcell的Mesencult-ACF血清培养基效果也非常好。如果实在没有钱（呵呵），就用FBS培养基，不过记得加5-10ng/ml的bFGF，细胞同样会长得很好。
. m0 v! T- e7 h, k$ M最后，如果做分化，个人认为不要用上述无血清培养基，因为上述无血清培养基都是为MSC培养优化的，根据说明书尤其优化的对血细胞的污染。同时由于无血清培养基都是保持MSC干细胞状态所涉及的，所以添加文献报道的因子可能会被抵消很到的分化效果。所以慎重！（我没有尝试过，不过有文献报道某些因子甚至脐血浆对分化有抑制作用）

barley

回复 forcat 的帖子. u8 ?. R) W; {3 G( U! T
$ e  }; n8 q- x$ n1 n) a
分析的太好了，学习~~~牛人啊