MEF feeder 的问题 γ or MMC

白巧克力

  大家做feeder的MEF是用γ射线照射还是用丝裂酶 C啊？
* S7 \& m1 {  ~( E$ G8 Y 丝裂酶C对细胞的毒性不小，但是国外文献大部分都是用丝裂酶C，不用γ射线，国内的话，是不是有条件就用射线呢？$ i7 Q3 t8 ?$ M
总感觉吧MEF拿到医院，感觉再包好也不放心。。。 。。。
$ U* ]" S2 L- D( s; Q1 A 大家什么意见啊？

huangcong1988

自己用丝裂酶C处理吧，操作很简单的，用射线处理，度很难掌握

majing217

我正常做feeder就用丝链霉素C

chutu

有γ射线装置的话，还是辐照处理省事。现在还有代替γ射线的x-射线辐照仪，更好用

guo6259

用丝裂酶素C吧，经济有实惠。. |/ C8 Z5 h/ {! u5 @: z
用医院买的用于抗肿瘤的就行的。
1 b( I7 h" \# t: h$ M" w0 F- x* J效果也很好的。用海正的就不错。

zhusealin

有条件还是用辐照比较好。一次可以处理一批冻存，也不用担心有残留毒物。我们就是把需要辐照的MEF消化下来都装在一个50ml离心管里，拿去辐照。如果路途比较远，就放4度运输。一个50ml离心管装10的9次方MEF，辐照完了就冻存，用的时候再复苏。

白巧克力

回复 zhusealin 的帖子" ^5 L" I% @( C" S( V

& `- A& p6 A, v3 y! i谢谢！！
4 n3 F% @; W0 Y- H. Y问几个问题：- j# g, f: w- \4 _5 W/ W
1. MEF冻存的密度是多少？p3代的细胞应该不少，收集起来去照，照完拿回来要计数分装冻存的吧？具体是多少呢？' [4 }( T" w$ O1 q& s
2. MEF做feeder做人的ips铺板密度是多少？
" x9 |) T0 n; n, B谢谢！

白巧克力

回复 guo6259 的帖子% F' O' o9 d$ ]( N( B5 [

1 {) t' N9 U. w  _第一天铺feeder，让其贴壁，第二天加丝裂酶C，反应多久？要用PBS还是DPBS洗，洗2遍就可以加入MEF培养基放培养箱不用管了吧？

刘森泉

我们实验室一直用丝裂酶C处理的，感觉还好啊，就是注意MEF状态要好，可以让你作feeder一段时间的，要是状态不好那对你的目的细胞效果就很差了。

ligangtiancai

回复 白巧克力 的帖子) f* {1 L! N9 ]
& F- t" \, `5 A/ D+ Q3 w$ }
1.冻存密度取决于后面iPS铺板的密度，例如如果一直是T25Flask 进行1:6传代的话，可以一支冻300万（3X10的6次方），然后每次复苏2支就行，冻存前计数
( @  ]0 G6 b8 k2 L8 e5 S2. 推荐密度为75万/cm2，考虑到复苏率的问题，推荐铺85-90万/cm2