未分化小鼠胚胎干细胞表达GATA4吗？？？

xiaoyurly

染色发现有GATA4表达，real-time也有一定的表达。- n- X9 R, k# k4 K) r
但有大牛说原始状态的胚胎干细胞不应表达GATA4的。
9 S7 x1 [- R; @) N" ~疑惑中0 M# Q+ r( B' b2 z- G
问一下大家的细胞系是什么状态
7 ~: x0 M) o, F' P+ ]* @* B; Q0 I- J谢谢

christophe

我看我的realtime结果GATA4的比较也比较高，GAPDH约为16个cycle，GATA4约是29个cycle。* i  D+ D0 I$ p% g5 w6 O( @
你的realtime结果Gata4的cycle比内参高多少？% h4 L5 u7 J7 X, V( w

Yedan

* a% N& v4 E% C( M" H% g* T# ^. B

) h8 o# @$ u) N回复 christophe 的帖子/ t8 `/ y9 S& `, k

4 H4 X9 j/ h7 d6 G$ ?% J. X定量△ct大于10一般习惯认为是没有表达了...而且还要看溶解曲线的情况，引物扩增有时候ct也会在35以内的

jn808

“定量△ct大于10一般习惯认为是没有表达了” △ct指的是？？

Yedan

& o3 f$ k& @: r/ D: Q/ c0 E9 z

' j" ~' h6 @8 y' Z7 M5 I回复 jn808 的帖子
2 X, F9 m- _$ r" I& p3 p5 ]! v9 ]8 Q  S4 y' y
目的基因ct减去内参ct
4 e/ }' }6 W$ Z" P( Y( o# z
6 |/ [' ^/ K" N' {' `, ~这是用△△ct的方法自己计算定量PCR结果必须知道的，虽然现在的PCR仪基本都直接show出relative quantity图,但是最好还是知道下怎么算得比较好，因为不是每对primer的扩增效率都是100%，而△△ct的计算方法又是建立在扩增效率为100%的前提下的。（如果用的是7500甚至是7900，当我没说过，那种机器会自己校正的，非常人性化。）