未分化小鼠胚胎干细胞表达GATA4吗？？？

xiaoyurly

染色发现有GATA4表达，real-time也有一定的表达。
# ]( _6 C: M1 e& _) U但有大牛说原始状态的胚胎干细胞不应表达GATA4的。# A' j1 y6 X# ?4 A$ d4 i1 U
疑惑中. g$ A* h$ ]5 ^$ M
问一下大家的细胞系是什么状态, f& d$ V) V& d- _* z3 y
谢谢

christophe

我看我的realtime结果GATA4的比较也比较高，GAPDH约为16个cycle，GATA4约是29个cycle。, v1 H+ v. F7 x( \$ f6 C; Y1 H3 @1 M
你的realtime结果Gata4的cycle比内参高多少？- V  Y' x% n8 Q. M

Yedan

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4 |" o: a% f+ z- g2 \; g2 O回复 christophe 的帖子$ ]$ ?  T7 h: S3 X( q1 U! x$ E  W. I3 v
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定量△ct大于10一般习惯认为是没有表达了...而且还要看溶解曲线的情况，引物扩增有时候ct也会在35以内的

jn808

“定量△ct大于10一般习惯认为是没有表达了” △ct指的是？？

Yedan

% C0 x6 n3 i+ V, m* H
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8 J- S5 ?: \' A! \' K' T目的基因ct减去内参ct, C1 Q' z7 I+ X3 n7 k/ h4 M0 B8 K% T
% L2 z2 G: y! k: c7 r
这是用△△ct的方法自己计算定量PCR结果必须知道的，虽然现在的PCR仪基本都直接show出relative quantity图,但是最好还是知道下怎么算得比较好，因为不是每对primer的扩增效率都是100%，而△△ct的计算方法又是建立在扩增效率为100%的前提下的。（如果用的是7500甚至是7900，当我没说过，那种机器会自己校正的，非常人性化。）