谁给我讲讲conditional knockout技术好在哪？

shylotte

与以往的细胞示踪手段相比，Ｃｒｅ／ｌｏｘｐ 系统的
( v7 F0 J. O- V标记方式具有良好的靶向性，只会在表达组织特异
6 ?+ t. N4 Q- X# n+ i性启动子的细胞内发生，很大程度上避免了错误标
" J4 B/ }( o3 e/ P/ _4 X记的问题。 此外，Ｃｒｅ／ｌｏｘｐ 系统最大的优点是对基
) K$ k' x2 J( u3 m! T因组进行了修饰，具有遗传特征，发育过程中表达过
/ L/ N$ q: k% kＣｒｅ 的细胞以及其后代所有的细胞都会被永久地标
& _9 _3 g/ t( y; v9 {记。然而，这一特点也导致无法对标记时间进行$ G* }/ u/ ~) W
控制。8 A4 i, Z8 x" B& [: j
为了解决标记时间特异性的问题，Ｍｅｔｚｇｅｒ 等在
0 \7 |/ c2 a1 Y  R/ T' B; i7 L4 tＣｒｅ／Ｌｏｘｐ基础上制作了一种新的小鼠模型［１７］1 N8 E( Q6 z; s) r' r
，这种
9 f5 Y' u/ o& V0 x. U; Z, C模型利用了雌激素受体为核受体的性质，借此调控0 h+ \& Y0 L- D* F7 ^7 p
Ｃｒｅ 入核的时间。 该模型中的 Ｃｒｅ 与经修饰的人类% }' I, N, j% Z5 o6 C6 r
雌激素受体配体结合域融合在一起表达 （Ｃｒｅ-
# {! x6 G% j% H. d5 J6 M  z: |ＥＲＴ+ G+ t  `9 c: g2 f  H6 d/ _, n
），该受体不结合雌二醇，对他莫昔芬（ｔａｍｏｘ-& Y. C  W) m' M! \
ｉｆｅｎ）有亲和性。 在没有他莫西芬的状况下，由于雌0 j. }2 Y+ Q& q. h
激素受体停留在细胞质中，导致 Ｃｒｅ 也无法进入细! w1 |2 ]2 l! p# n- P* ]
胞核，只有在外源性他莫西芬的条件下，Ｃｒｅ 才能伴% ]5 s+ a# O1 O
随雌激素受体进入细胞核，实现对Ｌｏｘｐ 片段的重组  v' u, p3 g& }2 z  X6 x
修饰。 因此，只要控制他莫西芬的注射时间就能实
1 I0 Y. I$ y; c' @现对敲除事件进行时间上的控制
2 H6 [  T2 f& p9 k9 _
2 ~8 G( a  [+ c% B. @% w——————二楼正解（其他确实太官方了），以上出自一篇中文综述《细胞谱系示踪》，通讯作者陈林

moluxingke

回复 echowdk 的帖子; J/ ]' w* w1 Q7 q0 T8 j
9 L3 R! F; j. A* W0 Z# u# Y
好吧，那就来个通俗点的，条件性敲除最大的好处就是你可以清楚地知道某个基因在某一种组织或器官里面发挥了什么功能，或者在某一个阶段发挥了什么样的作用。有些基因非常重要，全身表达，比如PTEN，你如果全部敲除，那小鼠就在胚胎期死了，你无法研究它在成体发育过程的作用了，但是换用了条件性敲除，这样就减少了胚胎期死亡的几率，你就可以单独研究它在肌肉了、肝脏了、卵巢了等地方的功能了。
4 \7 h/ A" |; M8 y8 e3 c& ^如果说某个基因全身敲除了小鼠也不死，那么小鼠要是有表型的话，你也不敢肯定到底是哪个组织里面的？比如某个基因X，你把它全身敲除了，结果小鼠不育，那到底是生殖器官的影响大呢，还是营养代谢出了问题呢？还是说神经的影响呢？

moluxingke

说道时间的问题，楼上用Vasa-cre的例子很典型，比如你要研究基因X在初级卵泡以后阶段的作用，可以用ZP3-Cre，如果想早一点，在原始卵泡活化阶段，可以用Gdf9-Cre，如果还想更早一点，可以用Vasa-Cre，就是这样了，