提取小鼠骨髓干细胞之淋巴分离的疑惑

meggie

每次收集的骨髓造血干细胞怎么样才能与淋巴分离液离心之后分层效果最好  各位有没有谁 给我点具体步骤 剂量 及转速时间等 给我参考下 谢谢了

青云之上

1.  将血液按1：1比例轻轻注入分离液，注意不要破坏页面；
* j3 V+ y& x# H- S# z( ~2.  1100rpm 30分钟；. |, O# W& @: `" C9 Y; S+ W
3.  吸取中间层，PBS洗涤两次，1000rpm 10分钟每次；
; T, G: M% p, {# ?4.  计数，待用。

evial

300个G，20分钟，会分四层，最上层为血清黄色，其薄薄一层就是你要的单核细胞层，轻轻吸取。
) Z8 ]; \9 h; o7 o" K- [8 S再用红细胞裂解液去除红细胞。

cgc123

基本步骤二楼的说得比较清楚了。主要要注意第一步将血液加到淋巴细胞分离液上时一定要慢慢加，边加边提高枪头的高度不要破坏两种液体间的页面层。

chslyx

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" u, q- z# G$ Q1 S+ ]5 K) x. s6 r4 w% _1：1PBS稀释，缓慢均匀加到分离液中，水平转子600G，20min，慢升慢降，那样细胞层会比较明显