关于融合液的问题

st_oliver

第一个问题：孤雌激活所用融合液和核移植所用融合液是否一样？如果一样，大家都用的是什么公司的，或者是怎么配的啊？如果不一样，问题一样。+ z* B( E! Y% @6 C! ]
第二个问题：不同物种孤雌激活和核移植所用融合液差别大否？那么猪呢？
" ~  d0 w, S( U# {& |7 u/ I第三个问题：我看到一个配方，其中0.28M甘露醇…，请问这个甘露醇是用水溶呢，还是NaCl？怎么调PH？  }6 R/ f" L4 f1 m8 R
非常期待得到大家的帮助！[/color]
8 X5 g2 \& g7 x$ p8 Z" U! J在动物克隆与疾病模型板块，貌似更新很慢，上一个帖子还是10月十几号的，就挪这里了。

POPOLD

水溶                 不调    2 M1 y' A) e( ^( w; j6 @
配好后 是弱酸  6.8左右  ，如果要调  用1mmol naoh  

xiaomingxu

2 p3 G* b  \- [7 }. i. E( x/ g
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5 L! \6 |' x! B, g3 s
' L2 L4 P  L, v# s9 y" h4 s第一个问题：9 ^  t; O* _1 H/ R, d5 y$ x
首先，孤雌激活不需要用融合液。核移植用融合液可以自己配置，成分很简单；) d; [: O4 n% B3 V% ]  |
第二个问题：! G9 M! Q6 H' h/ E1 T5 u9 g
孤雌激活各种动物不太一样，但基本都能通用，你可以看看相关文献确定什么物种使用什么激活液。一般人上使用钙离子载体联合6-DMAP；猪上也可以用钙离子载体（或离子霉素）联合6-DMAP，也可直接使用电激活。# f  p+ b/ |5 J# q" Z
第三个问题：
1 O& O7 W' H9 W3 Z6 f, E电融合液中会使用甘露醇，是水溶性的，一般严格按要求配好就OK，不需要再调。

st_oliver

回复 xiaomingxu 的帖子& q9 ^0 e6 [( i8 w' C) ~8 `1 Q/ q
6 P& ^2 X. ~/ c" J
谢谢你的帮助！) X, p. G/ R) s/ {- O( G! H
我之前激活用的都是电激活，用的是ECM 830（BTX），0.5mm 槽，融合液用的是Cytofusion Medium-Formula C，只是最近这段时间，很难拿到囊胚。很是郁闷。( J- l* O& x$ b6 G6 V6 w
我看了一个5 `3 j0 h; d: k5 x  X. ^
ECM ®  8302001 ELECTROPORATIONELECTROFUSION PROTOCOL
) R6 |) K) S# z6 B% U: n# E$ e6 [2 m其中融合液是0.3 M glucose with 0.05 mM calcium and 0.1 mM magnesium
2 |8 \" F9 n5 s! l/ i$ Rions, and 10 mg/ml BSA.
- \5 ~4 ?& D8 g9 Y" A: X; r. {而我查的其他文献大多用甘露醇，或者是山梨醇溶液。

st_oliver

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% v" b2 y2 X  ~. K# B+ i% C呵呵，谢谢啊

xiaomingxu

回复 st_oliver 的帖子" K% m4 N9 S7 W6 B; P$ ?4 z
% T. r3 r8 A+ p; w7 b+ S
我看你用的融合仪和融合液都没什么问题啦，可以从你使用的胚胎培养液找找原因，或者卵母细胞质量，如果都没问题，那可得做质控实验，是不是培养箱出问题了。

st_oliver

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3 S2 j+ C' a5 d' [7 L
$ }6 ^0 E1 a- f1 L, F/ X: x' |: c6 \3 o好吧，我知道了，谢谢你！以后多交流！

xiaomingxu

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4 H5 K: M9 g# k2 z) ?5 Q( J) ~+ Z" D; a7 t5 C5 V1 }- L) o" W
我看你用的融合仪和融合液都没什么问题啦，可以从你使用的胚胎培养液找找原因，或者卵母细胞质量，如果都没问题，那可得做质控实验，是不是培养箱出问题了。