Southern Blot大侠看过来

echowdk

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试着做了好几次southern blot都以失败告终了。
+ P/ i% q& J+ T有哪位大侠能给详细阐述一下做southern blot实验的窍门和注意事项。
# J* y8 F4 a" m( R3 qPS：主要针对动物，另外，需要检测单拷贝基因的~~

langziforever

呃~，怎么总是问这种很大的问题，真的很难回答，你最好仔细的看看分子克隆，或则贴一些图片或则说一下现象也好，其实一个实验的失败可能是由于共同的原因，但有时更有可能是由于一个小细节的疏忽导致的。对于southern，其实很多地方都可能失败，比如你基因组的提取质量和完整性，酶切的效果以及是否完全酶切，不同物种基因组及不同基因检测所使用的酶组合都是不一样的，而电泳跑的好不好，探针标记效率高不高，转膜效率，杂交液杂交方法，真的太多可能了，甚至可能你显示液用的不对也可能导致你前面做的再好，还是啥都显不出来，所以，我觉得如果你很多次都失败了，那么你有必要在下一次实验前，仔细的阅读分子克隆或相关实验手册，了解这些关键步骤，以及每一步如何验证，这样才能找到问题所在，并解决问题！祝你好运，下此成功吧！

echowdk

回复 langziforever 的帖子0 S3 K! j" t: R
# c7 ]0 B# {. H8 j+ r) T4 `) g
呃~~要真细说起来，影响因素还真不少。
- Z  p4 W8 j& e* C6 s  m很多因素我都排除了，现在就纠结在探针设计的问题上，能不能具体给我讲讲探针设计的一些方法和注意事项啊？5 s0 C) ~/ G9 p! G3 L6 V3 }0 h
还有就是弱弱地问一下，你们跑电泳的时候就用普通的电泳仪就行了吗，对电波什么的没有特殊要求吧？

164ly

探针是怎么设计的？你做的是DIG标记还是同位素标记？整个实验有没有阳性对照？阳性对照结果正常吗？
, V8 h7 ]0 q5 s如果是刚刚开始做，建议先做阳性对照，摸索试验流程，排除试验操作本身的问题