紧急求救！跨越-80℃，细胞都被冻死了！

yangwy028

我们的-80℃的冰箱不能用了，于是在冻细胞的时候就把用DMSO冻的细胞从-20℃直接移到了液氮里面。结果几天之后细胞的活率只有个位数了！（冻之前是90%以上的）各位大侠有没有什么好的办法来解决一下冻存的时候跨越-80℃冻细胞的？或者帮忙想想办法在新冰箱到来前，怎么样才能安全存储细胞而保证活率不变？

zzc2211

没有碰上这些事，临时借其它实验室的-80度冰箱，临时借宿

aulenuyah

用-80冰箱目的是使细胞缓慢通过冰晶的临界点，避免低温损伤，这个过程是不能省略的，冷冻的过程要缓慢。直接从-20到液氮是不行的。建议楼主与其他实验室联系一下，看看能否暂时借用一下。& a4 `9 P. y) r. U9 Y
如果实在不行，我提个建议，不知能否可行。弄一个液氮罐，里面装1/2或者1/3的液氮，将原本将要放在-80的细胞悬挂在液氮上方大约10厘米左右（也可以适当增减），放置时间同-80冰箱。然后将细胞沉入液氮中。以前看制作冻精是这个程序，不知道在细胞上行不行的通。

懵懂干细胞

有听说过悬在液氮灌口几小时的做法！具体自己没试过！

yylhxylong

最好找个实验室借用一下吧~实在不行，可以用楼上几位推荐的液氮悬挂法吧。不是有那种取泡在液氮里面东西的漏斗嘛，可以把细胞放在那里面，然后下面放少一些的液氮，多少可以形成一个低温的温度梯度吧。或者你也可以找一些干净的小布袋，把细胞装在布袋里面，然后悬挂在液氮罐的边缘，来让细胞不会很快的进入-196℃的温度，可以保持吧。
: J7 V, d/ a; v8 U6 k祝好~

dianying

回复 yangwy028 的帖子* A$ x4 C( G; R
9 I( m9 _6 O- R3 V
我见过有人埋在干冰箱里过夜，第二天再存到液氮罐里。这也是没办法的办法。

懵懂干细胞

回复 yangwy028 的帖子
' z. N% J  U% P# o0 G, ~! `+ U) }, U' E2 `# O- a
我记得以前我分享过一种方法就是用泡馍降温，实验室很多15ml,50ml离心管包装里面的泡沫也可以有程序性降温的作用哦！我曾经试过一次就是吧两个15ml离心管包装里面的泡沫一起封闭使用，里面就放要冻存的细胞，不过当时是没有冻存盒了，是直接放在-80，不是液氮里面，效果还不错！楼主有兴趣的话可以试一下

jhu132llh

液氮面悬挂法，虽然很古老，但是提哦按键摸索好了以后存活率也差不多有七八十的，也可以接受了

yangwy028

无论怎么样都要保证一分钟降温一度左右，领教了！谢谢诸位

ditiger

我们一般是包上棉花，直接扔-80，两天后，在转到液氮，效果灰常好~~~