如何更好地冻存人诱导多能干细胞（附原文）

细胞海洋

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& K- Z: G/ U  u, |( `8 F人类多能干细胞因在再生医学上的无限潜能而备受关注。对于最终的临床应用而言，干细胞的低温冷冻、保存和运输都是关键的因素，因为这些应用将需要很多质量可控的干细胞。但令人沮丧的是，我们现在还不清楚该如何很好地冻存和解冻这些细胞，这严重限制了实验的可追溯性。
6 l! D5 ], r+ G/ ^0 N& e1 o' T美国Sanford-Burnham医学研究所的研究人员在几年前曾证明，将人胚胎干细胞（hESC）冻存在10%的DMSO中，会导致解冻后一个关键的多能性标志物（Oct4）的几乎完全丧失。如今，该研究小组开展了一项系统研究，比较不同的冻存步骤对人诱导多能干细胞（iPSC）的影响。这一研究结果发表在《Stem Cells International》杂志上。
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近几年来，很多研究小组都尝试优化hESC的低温冷冻保存，但iPSC冻存的影响还研究得很少。就目前而言，冷冻保存仍然是iPSC相关应用的路障，包括基础研究、再生医学转化研究或药物开发。因此，有必要开发并验证一个高效的步骤，以便建立冻存细胞库。: ~: h$ \. I$ G; U: s* c

5 x( _& F0 ^3 ?. r8 W( T: m在这项研究中，研究人员比较了人iPSC的三种冻存模式：STD模式：在冻存管中用10%的冷冻保存剂冻存；ACC模式：在冻存管中用Accutase解离细胞并冷冻；PLT模式：在可编程的冰箱中对多孔板中的贴壁细胞进行冷冻，使用一步法或多步法冷却步骤。他们比较了四种冷冻保存剂，包括DMSO、乙二醇（EG）、丙二醇（PG）和甘油（GLY）。
  u; K- Q  `% k研究人员发现，人iPSC的复苏差别很大，这主要取决于冷冻保护剂的性质和所使用的冻存步骤。结果表明，乙二醇的毒性低于DMSO，且比丙二醇和甘油更好地维持了多能性。在ROCK抑制剂和乙二醇存在时，使用Accutase解离iPSC，并采用可编程的冷冻，显著改善了多能干细胞的产量，与标准模式相比提高了最多6倍。此外，平板中贴壁细胞的冻存也非常高效，此条件下的复苏与ACC模式相当或更高。 , i- R: a8 C! Q: k: W; M6 ~* r
作者认为，弄清楚处理iPSC的细节，以开发出真正标准化的最佳步骤，这对生物医学研究的发展很关键。（生物通 薄荷）
" i  p7 |9 m* G$ t+ p3 U. J: h/ W原文检索
8 C3 t; B8 h  a3 y5 P+ Q, \DMSO-Free Programmed Cryopreservation of Fully Dissociated and Adherent Human Induced Pluripotent Stem Cells8 e% h: x2 K; ]3 F) l8 Q
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(http://www.ebiotrade.com/)$ A" J/ h( l5 ~( H: w
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8楼原文 感谢naturalkillerce 提供

tjbone

先谢谢了领导！！！！！

shuishanglingzi

谢谢版主！我们实验室一直都是用10%的冷冻保存剂冻存，复苏后的多功能性还没验证。看来要关注这方面了~~

sunny2829

文章不知道有没有？嘻嘻~~

ly200101042

我现在复苏了好久，怎么都不复苏活，今天刚看见有几个小克隆，呵呵。还不知道多能性怎么样啦

wys7416

人iPSC的复苏差别很大，但也许可能与其产生的条件也不同有关，不仅是与冷冻保护剂的性质和所使用的冻存步骤有关。但部分人使用10%的DMSO，解冻后仍能扩增，但对OCT4标记，可以继续显示，这又是什么原因呢？结果相互矛盾啊

qjlvy

这个问题海真没注意到，看来抓到一个细节研究对发paper还是挺有用的
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naturalkillerce

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1 g$ r3 j! w: jDMSO-Free Programmed Cryopreservation of Fully Dissociated and Adherent Human Induced Pluripotent Stem Cells: F& ?4 }7 R4 g2 `