有没有从细胞中快速提取基因组的方法？

michaelgibh

最近要检测人基因组的变化，有没有不用试剂盒而仅仅用简单的方法来得到基因组然后用于PCR鉴定

langziforever

如果只有做PCR的话，简单的方法有很多，我们曾经直接加几个细胞去做PCR的，如果好P的基因也可P出来！如果需要提取基因组，去分子克隆上找找，肯定是有的，其实原理很简单啦，就是自己配点裂解液破细胞，然后抽提蛋白质，最后沉降DNA就可以了！只是我这里没有现成的protocol

ilovelife

我这里有一个从小鼠尾巴中提取基因组DNA的方法，用来做PCR，很好用。请见下面。
$ i5 A3 L4 M7 z; l6 z. O: X5 j
. k- c# Q2 @9 U# J! h# Q5 F# dQuick Preparation of Genomic DNA Isolation from Mouse Tails
: c$ C) N; ]: ?( e* U, I% x# h
/ ~& E& r( c+ [5 @" }1 l5 v1 P" dQuick Tail Buffer
" \' w+ h) D$ L* \* ?
, ^0 l" e: [3 r9 g# Q  5 ml        1M Tris (pH 8.0)
8 m0 Y$ _5 ~/ y/ `8 F. ]25 ml 1M KCl, o5 ?% y- M8 y1 ]; _& G, e
12.5 ml 20% NP40   
$ {; K2 Z6 }1 L# Y$ B12.5 ml 20% Tween 206 K; p4 g/ v# z/ L4 W
445 ml  ddH2O/ |, F1 k' k3 M: P! W
500 ml  
0 H) Q: t$ T, v6 f& w1 E6 ~5 y+ G' O5 e, F
1.  Obtain 1-2mm tail tip; place in eppendorf tube.$ i& r' J& g% x
2.  Add 100ul Quick tail buffer:  10mM Tris, pH 8.0 + 50mM KCl +        
( P" ^6 T5 R( ]* M+ G- C0.5% NP40 + 0.5% Tween
8 i, {. J$ v: |6 T9 T1 [ 3.  Heat to 95°C for 5 minutes. Spin briefly.
* A# w* J. }3 g% _  P* b2 D 4. Add 50ul Quick tail buffer + 1ul Proteinase K (20mg/ml) per sample. I  + P+ v) c& G, V' E! Y; ?
      usually make a master mix and then add 50 ul of buffer/proteinase K mix  
! b. Q% B9 g2 C% O" {      to each eppendorf tube containing the tail and 100 ul of tail buffer. Invert  
1 Y( ?$ J8 [3 r      the tubes a few times to mix. ( a# R# d1 g8 o9 O, p) @5 c
5.  Incubate at 50-55°C waterbath for 4 hours to over night (37°C waterbath
2 W" |$ ^" s3 j3 D       will be ok as well). Make sure tails are submerged in solution. For best
. I, Q# s1 |% D6 T7 Y7 H9 U) M' G       results, shake the tubes a few times every a few hours during the
8 F2 A- u) |- @4 V) J% V       incubation period.
8 T* [8 {) ?. {0 ~ 6.  Next day, shake tubes a few times to completely dissolve the tails.  7 a0 z  O" l& @: ]9 w8 d! k+ |" i
7.  Incubate for another hour or longer at 50-55°C.3 h% A, d2 B/ C6 W( a
8.  Heat to 95°C for 10 minutes to inactivate proteinase K.
" h: D4 E$ l! t, D' t" S. [ 9.  Brief spin in centrifuge (1 minute at 10,000 rpm). Use 1 ul for PCR
6 l+ P$ U! W5 E+ y      genotyping./ P* b: C" m* c5 a4 T: \% T
10.  Store samples at -20°C if necessary.
! R$ v; M1 T9 C$ ~  i7 _' P: G3 w& [. ~7 V9 q/ z* Y0 U
我想从细胞中直接裂解应该更容易些，希望对你有所启发。2 Q( u, Q  V2 h) ^) k# G  [% O

279042256

细胞的话直接加dd水至你实验所需的量，100°10s，0°20s，三个循环或者在pcr仪上95/4°3-5个循环再加其他东西就行

bobo198666

把细胞消化下来，离心去培养液，加NP40就可以，裂解液可以直接做pcr鉴定

michaelgibh

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, k. h/ J1 _3 [% G恩 谢谢