逆转录病毒的包装

细胞海洋

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- X2 E, ~) J. @8 a& C建议你发新帖提问

huangcong1988

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/ Y2 m6 c8 R( b7 b0 f7 F2 A# j4 \  W! J4 j9 z9 n, X$ y
你这个For retrovirus: 12ug of gene of interest, 6ug of Gag/pol, 1.5ug of VSVG是做过吗？还是就自己摸的条件呢？因为我之前看的好像是10:9:1，VSVG加的很少的，这个问题一直困扰我

liunianshui

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/ C8 j9 ?  ~2 p2 r1 x* ?7 m9 [& B# t! c
这个还是很经典的啊' f, C% @# E! @8 |  @* T

小兔子lp

请教一下，我转的目的质粒（4因子）没有GFP标记，是否也可以通过DAPI染色观察荧光的方法来鉴别其转染效率呢？

小兔子lp

回复 99牵牵 的帖子, |/ T( [1 _, s$ q; {1 x6 A
+ d6 r5 s  ~2 S. x+ U9 d& s
包装293T的话，细胞密度很重要，最好细胞融合率达90%以上再进行包装；另外，不同转染试剂的细胞毒性不同，比如罗氏fugene 的毒性要比天根lipofectamine 2000 小，注意试剂选择；再者，转染试剂的作用时间通常在8h内，因此，转染后6-8h 建议换成含10%FBS 高糖DMEM培养液，以减小转染试剂中毒性物质造成的细胞损伤；最后，PS双抗会降低某些转染试剂的转染效率，对于这些转染法而言，复苏培养293T 细胞时，培养液是不可以加双抗的。