逆转录病毒的包装

细胞海洋

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huangcong1988

回复 momocy 的帖子
0 |5 i, L8 o2 l1 ^: L  w) y( q' S1 n9 S8 w% c) O
你这个For retrovirus: 12ug of gene of interest, 6ug of Gag/pol, 1.5ug of VSVG是做过吗？还是就自己摸的条件呢？因为我之前看的好像是10:9:1，VSVG加的很少的，这个问题一直困扰我

liunianshui

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5 \! [% O' u$ T2 p) q  ^* |$ g) O. r7 L; `
这个还是很经典的啊( v  P9 t% p. j2 H( p- I+ ]# \

小兔子lp

请教一下，我转的目的质粒（4因子）没有GFP标记，是否也可以通过DAPI染色观察荧光的方法来鉴别其转染效率呢？

小兔子lp

回复 99牵牵 的帖子
5 b$ R+ B6 n) M/ H: ^& K
+ G; j: i9 D" V0 w/ `8 ]包装293T的话，细胞密度很重要，最好细胞融合率达90%以上再进行包装；另外，不同转染试剂的细胞毒性不同，比如罗氏fugene 的毒性要比天根lipofectamine 2000 小，注意试剂选择；再者，转染试剂的作用时间通常在8h内，因此，转染后6-8h 建议换成含10%FBS 高糖DMEM培养液，以减小转染试剂中毒性物质造成的细胞损伤；最后，PS双抗会降低某些转染试剂的转染效率，对于这些转染法而言，复苏培养293T 细胞时，培养液是不可以加双抗的。