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ningtinglu

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楼主

发表于 2011-11-25 20:35 |只看该作者 |倒序浏览 |打印

转染293FT细胞包装慢病毒，转染时有阳性control的质粒，control质粒和目的基因的质粒上都有GFP。转染24小时后看GFP荧光，结果阳性control的转染效率有70%左右，而目的基因的没有荧光，操作都是一样的。请问各位大侠怎么目的基因怎么没有荧光呢？

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沙发

发表于 2011-11-25 20:50 |只看该作者

不知道你的目的片段多大，有种说法，打1000kb，转染效率要将（50%？，记不清了），FACS检查了么，有时GFP很弱，肉眼看不到

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phdyhm

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藤椅

发表于 2011-11-25 21:20 |只看该作者

这个原因有很多种，如你插入目的片段的大小，慢病毒包装后的浓度、启动子与目的基因是否匹配（兼容性）、慢病毒载体本身的特性（可以插入多大的片段，我以前也碰到过这样的事情，就是因为那个载体本身的问题），因为你没有提供详细的数据与资料，只能大概推测一下。

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rexhz

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板凳

发表于 2011-11-25 23:34 |只看该作者

目的基因载体的质粒量要多点，比空载的多加50%

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绿雪

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报纸

发表于 2011-11-26 12:45 |只看该作者

目的基因与载体的GFP基因是融合还是各自用一个启动子？如果是融合的话有两种情况可以考虑：1. 融合后阅读框是否正确，即目的基因和gfp是否通读？2.阅读框正确，但蛋白不能正确折叠导致无法看到荧光。在保证阅读框正确的基础上再考虑其他问题。蛋白不能正确折叠这种情况我就碰到过，wb检测能得到杂交带，但就是不能看到荧光。