间充质干细胞不明原因全部漂浮

xintianaric

我的间充质干细胞养到第4代，然后用脂质体转染法将EGFP转染进去，转染的时候还好好的，还继续换液培养了一两天，然后加G418进行筛选的时候却发现本来贴壁的细胞全部脱离瓶壁，像一块皮那样子掉下来，这到底是为什么呢？

phdyhm

脂质体具有一定的毒性，可能是脂质体毒性引起的细胞死亡。建议采用慢病毒转染，虽然价格比较贵。

流浪的波斯猫

是不是细胞密度太大了的缘故呢 还有你加入G418的浓度是否适合
; W, F' p: |- R& y: v( Z) b7 f有没有确定下用脂质体转染的效率 如果没哟转染进去 G418对原核和真核生物都是有毒性的啊

zerollx

    不知道你说的是脂肪干细胞还是骨髓干细胞，对于脂肪干细胞，经常会出现接触抑制后脱壁的现象，如你所说，但是这与你的培养体系存在直接的关联；所以你应该拿正常的细胞培养让其接触抑制几天再 看下是否脱壁，若脱壁，说明是你培养体系的问题，则需优化之；反之则是转染导致的，那你得考虑是否改变转染方法；你也可以加明胶铺板在种 细胞，看下如此操作是否会改善这种状况。

sailree

有可能长过了。

yangwy028

做个流式检测一下到底是什么原因吧

漂泊的风

估计是细胞的密度太高了，在转染的时候细胞的密度不可以太高的，太高了转然后是会有好多漂的细胞。

xintianaric

今天去到换了液后在镜下一看，好多游动的小虫子，到傍晚的时候培养基全浑浊了，转染的细胞全军覆没了……应该是真菌污染了

漂泊的风

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8 q. \, A1 m$ ~. U
( U2 `: E- z& @: o) z转染是比较容易污染，因为要加入外源的质粒什么的，希望下次成功。

deshenglll

是不是细胞密度过大了。过大的话会一层脱落的。