干细胞传代时的数量为多少合适？

sarah19860420

关于成人干细胞传代时，每个T25瓶传代后应该为多少个细胞，对于细胞生长速度与生长状态是最合适的？ 汇合率如何确定？每个人看到的汇合率貌似都不同。而且成人干细胞每次传代的比例为多少比较合适，我之前是按照1:5传代，结果后来按照1:4传代，细胞还是很少。而且当细胞长满瓶的时候，细胞数感觉也不是很多。细胞都很大很薄，这是为什么呢？复苏的时候的细胞才是第一代的，很疑惑？

流浪的波斯猫

不知你做的成人干细胞的来源是哪里 我们做骨髓的话一般都是按照1:3的比例传代，传代过程中基本上第二天就有30-40%汇合度的样子，但是细胞在传代前的状态是很关键的，一般细胞处于对数期的时候状态与活力最好，就是汇合度达到80-90%的样子6 |, k7 `6 _+ K7 g6 B
还有 你说你的细胞形态都是很大很薄的那种 估计是你在培养的过程中细胞的性质已经发生了变化，即分化，这种细胞形态体积比较大，增殖很慢，再说你没有经过流式或其他表面MARKER的鉴定，很难下结论1 `; z/ B, `9 j3 E) J* `8 X
一般情况下，我们用15-cm的dish培养细胞在长满后细胞的数目可以达到3-5*106的，可能细胞的来源不同，大小会稍微有差异，但是整体上各种不同来源的间充质干细胞的差异还不是很大的

song58

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' g( k8 x. u! o8 ?8 h/ `5 h) ?1 {5 y请教一下：) ^" F) x/ l9 N* B: u. }" }# d
间充质干细胞，你一般怎么养？培养基里添加特别的生长因子吗？能传多少代？

azzyou

我们是用皿养的，到80-90%汇合度就可以传代了。楼主你那个传代密度显然很稀，细胞传得稀的话，细胞就会很大很薄，我以前也出现类似的情况。一般的因为原代的密度不均匀，所以1：2传代，传代间隔要短一点，这样细胞既不会太稀，生长迅速的细胞又不会被自身分泌的代谢产物而影响，而差不多3，4代以后细胞生长趋于缓慢所以就适当改变传代比例1：3，传代时间间隔也拉长。

流浪的波斯猫

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  c8 [4 b$ B0 i6 N) B! j间充质干细胞的正常培养一般是不需要加什么特殊饿生长因子的
8 s& _% @3 B  w# t只要加一定的FBS  一般的含量是5-10%) u- F* J2 P$ v
一般原代要传到3以后算是比较的纯  一般的实验研究可以用3-10代的细胞
% y5 F( U0 _# d+ R# U. u1 d至于能穿多少代 这个不好说 我们先前的实验室传到二十多代吧 但是超过10代的都没用过

松鼠

之前在Nature Genetics上看到一篇文献，说胚胎干细胞经过几代培养后，人类胚胎干细胞系基因组会发生变异，从而可能会引起治疗过程的不稳定性 成体干细胞经多代培养后应该可能也会出现基因变异 一般临床移植用干细胞最好用传3~6代，但用于检测基因表型则传代次数应该不会影响

sarah19860420

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( H6 {, S+ a! |2 S; B  Z. e0 p: p* h0 J2 u6 e$ l0 }7 N. d: [4 o; t+ g
生长缓慢为什么还要把传代的比例变大呢？我现在也感觉我的密度有点稀。之前是老师告诉说要1：5传的。后来我发现密度很稀，就改成1:4感觉没有特别大的效果。那现在细胞变大变薄，还有什么补救的方法吗，原则上我看细胞是要两天换一次液。那我现在每天给他半换液，会不会加速它生长呢。？

fengxuechunyang

一般间充质干细胞长到80%以上就可以传代，但是要注意胰酶消化的过程情况如何。如果确定细胞状况较好，还是1:2较好。在以往的经验，传代后的细胞接种密度也很关键，太稀就长得慢，易分化。

sarah19860420

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关键是这个汇合度不是很好判断啊。70和80%都差不多啊。而且你说的细胞已经分化了，不会吧。这个干细胞是从病人身上拿到的，是TEDON stem cell ，我们的老师打算说让我养起来之后做下鉴定的，如果分化了，下面的实验就没办法进行了。555555555. 我大致算了一下，我的T-75的瓶子我穿戴的时候细胞数大致为3X105，正常吗？

sarah19860420

回复 松鼠 的帖子* m, D4 L3 H, e; y7 R. F1 M$ U

1 k' g7 R  Z1 m2 f* J3 m+ u能否把文献给附一下。多谢